bax蛋白在丁酸钠诱导食管癌细胞凋亡中的表达

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1、Bax蛋白在丁酸钠诱导食管癌细胞凋亡中的表达【摘要】目的：探讨丁酸钠对人食管癌Eca109细胞凋亡的作用。方法：以1mmol/L、2.5mmol/L和5mmol/L丁酸钠分别与人食管癌Eca109细胞共培养，倒置显微镜观察细胞生长情况，免疫组化（SP)法检测凋亡抑制基因bax蛋白的表达。结果：Eca109细胞经丁酸钠处理后，在倒置显微镜下观察到丁酸钠处理后的Eca109细胞形态学发生了改变，细胞生长明显受到抑制；免疫组化检测实验组细胞的bax蛋白表达阳性率低于对照组，具有统计学意义(P<0.05)。结论：丁酸钠可

2、诱导食管癌Eca109细胞凋亡，其机制与下调凋亡抑制基因bax蛋白表达有关。【关键词】丁酸钠食管癌细胞凋亡　　theExpressionoftheBaxProtEinumofSodiumButyrateonApoptosisinHumanEsophagealCarcinomaCellsEca109inVitroAbstract:Objective：Toinvestigatetheeffectsofsodiumbutyrate（NaB）onapoptosisinhumanesophagealcarcinomacellsEca

3、109invitro.Methods：Eca109cellsmol/L,2.5mmol/L,5mmol/L.Immunohistochemicalstainingemorphologicfeaturesofapoptosisinedbymicroscopy.TheexpressionratesofthebaxinthetestgroupotetheapoptosisinhumanesophagealcarcinomacellsEca109.themechanismoftheprocessmayberelatedtoinh

4、ibitingtheexpressionofthebaxprotEInum.Keybutyrate;esophagealcarcinomacells;apoptosis.丁酸钠(Sodiumbutyrate,NaB)是一种短链脂肪酸，可由植物纤维在肠分解而成，它是一种动物代谢所需的天然成分。其生理浓度可以引起多种生物效应，被认为是一种基因表达的调控剂，可以促细胞生长、分化和凋亡［1］，也可用于治疗癌症［2］。有报道正常结肠上皮需要一定浓度丁酸钠方可维持其增殖和分化，撤去丁酸钠引起细胞凋亡［1］。许多研究也表明NaB可以诱导包括

5、乳腺癌、前列腺癌、胶质瘤、白血病等多种体外培养的细胞凋亡［2，6］。但NaB用于治疗食管癌的实验研究国内外报道甚少，为此我们将NaB与人食管癌Eca109细胞共培养，观察NaB诱导食管癌细胞凋亡的作用，探讨其作用机制。　　1材料和方法　　1.1细胞培养　　人食管癌细胞Eca109购自中国科学院上海细胞生物学研究所，接种于含10%小牛血清的RPMI1640培养液中，在37℃、5%CO2培养箱中培养。　　1.2丁酸钠处理　　丁酸钠(Sigma公司)，用PBS配成500mmol/L贮存液，-20℃保存。丁酸钠药物作用分3组，浓度

6、分别为1mmol/L、2.5mmol/L、5mmol/L，并设不加药的阴性对照组，分别于作用24h后收集细胞。　　1.3光镜观察　　取对数生长期细胞，用0.25％胰酶消化计数，用RPMI1640培养液调整细胞浓度为1×105/ml，接种于24孔培养板，2ml/孔，孵育24h后观察细胞已贴壁，吸弃原培养液。实验组每孔分别加入终浓度为1.0mmol/L、2.5mmol/L、5.0mmol/LNaB的培养液2ml，对照组加不含NaB的培养液2ml，分别培养24h、48h、72h后，在倒置显微镜下观察细胞生长形态，用l，接种于已置盖玻

7、片的96孔板内，待细胞贴壁后，弃原液，分别加入终浓度为1mmol/L、2.5mmol/L、5mmol/L的NaB培养液，设不加药的为对照组。每组每个浓度设4个复孔，继续培养24h。取出有贴壁细胞的盖玻片（即细胞爬片），PBS冲洗晾干，95％乙醇固定20min，进行免疫组化（SP)法染色，操作步骤按SP试剂盒说明书进行，同时设阳性、阴性及空白对照。胞质内出现棕色颗粒为阳性细胞，光镜下（10×20）每个浓度每张爬片随机计数1000个细胞，计算每组4张爬片的阳性细胞平均数。鼠抗人bax单克隆抗体及免疫组织化学SP试剂盒均购自福州迈新

8、生物技术开发有限公司。　　1.5统计学处理　　采用单因素方差分析和Poission分布法检验，以α=0.05为检验水准，为差异有显著性。　　2结果　　2．1倒置显微镜下观察结果　　不同浓度NaB作用Eca109细胞不同时间段后，倒置显微镜下可见，对照组细胞呈多边形上皮样，贴