资源描述：
《姜黄素诱导胃癌细胞凋亡中microrna表达谱的分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、姜黄素诱导胃癌细胞凋亡中MicroRNA表达谱的分析李强王斌生(通讯作者)柴琛(兰州大学第一医院甘肃兰州730000)【摘要】目的：研究姜黄素诱导胃癌细胞凋亡中MicroRNA表达谱的变化和在致凋亡中的作用，为临床使用姜黄素治疗胃癌提供理论依据。方法.•将BGC823和SGC7901两种胃癌细胞系分别培养于含10%胎牛血清、1000U/ml青链霉素的RIMP1640培养基，分別采用DMSO,10uM,50uM姜黄素进行感染处理48小时后采用流式细胞术对各组细胞凋亡情况进行检测，同时采用miRNA芯片技术检测miR
2、NA的表达，筛选表达差异miRNA，进行层次聚类分析。结果随着姜黄素作用浓度的升高，BGC823和SGC7901两株胃癌细胞株的凋亡率逐渐上升，两种细胞株50uM姜黄素处理组凋亡率较10uM组升高约3倍左右，与对照组相比，姜黄素处理组凋亡率明显升高，P均小于0.01。MicroRNA芯片分析显示在初步筛选出的129条MicroRNA中，与10uM姜黄素处理组相比，50uM姜黄素处理组表达差异在2倍以上的MicroRNA共计6条，上调表达MicroRNA2条，分别为miR-150和miR-34a；下调表达Micro
3、RNA共计4条，分别为miR-92b、miR-650、miR-9和miR-125b。结论:姜黄素诱导可使胃癌细胞系BGC823和SGC7901的MicroRNA表达谱发生变化，提示某些MicroRNA可能参与了姜黄素所致胃癌细胞凋亡。【关键词】姜黄素；胃癌；MicroRNA；表达谱【中图分类号】R735.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2016)17-0160-03胃癌是我岡最为常见的恶性肿瘤之一，我国胃癌的发病率高居所有癌症发病率之首，严重威胁着人们的健康和经济水平。目前对于胃癌的治疗仍以手术
4、治疗为主，但仍有相当一部分胃癌患者不其有手术指症需要化疗，或手术患者术后长期的化疗对于患者的远期毒性损伤较大［1］。中国传统中药姜黄素(curcumin/Zur)是一种从姜黄、莪术等姜黄属植物的根茎中提取出来的脂溶性酚类色素，作为一种天然安全的添加剂和染色剂广泛应用于食品工业之中［2］。研究表明姜黄素是一种具有多种生物活性的中药单体，能够杀伤多种肿瘤细胞［3】。微小RNA(microRNA,miRNA)是细胞内高度保守的非编码RNA,参与了包括肿瘤在内的多个病理生理过程［4】。有研究表明姜黄素可能通过调控miRN
5、A机制发挥抗癌作用［5】。因此本研究通过研究miRNA在姜黄素致胃癌细胞凋亡中的作用和相关机制研宄，为临床中药治疗胃癌提供基础理论依据。1.材料与方法1.1细胞株及试剂胃癌细胞系采用BGC823和SGC7901两株。姜黄素购自陕西听泰生物科技发展有限公司，分子式：C21H20O6,分子量：368.37,纯度99%,用DMSO配成lmol/L的原液，-20aC冻存备用。1.2细胞培养将BGC823和SGC7901细胞分别培养于含10%胎牛血清、1000U/ml青链霉素的RIMP1640培养基，放置于37°C,5%C
6、O2的恒温细胞培养箱内，每2〜3d更换培养液待细胞融合大于80%后使用胰蛋白酶消化细胞，种板培养或传代。待细胞稳定后分别将BGC823和SGC7901细胞以105/ml密度接种于96孔板中，加入200μLRIMP1640完全培养液,加入不同浓度姜黄素(10μM、50μM)处理。1.4细胞凋亡检测姜黄素作用48h后收取各组细胞,PBS洗2次，离心机800r/min,离心5min,弃上清。加入195μLAnnexinV-FITC结合液重悬细胞。加入5μLAnnexinV-FITC,轻轻混
7、匀，室温避光孵育10分钟。800r/min离心5min,弃上清，加入190μLAnnexinV-FITC结合液重悬细胞。加入10μLPI染色液,轻轻混匀,冰浴避光孵育。流式细胞仪检测。1.5MicroRNA芯片分析两种细胞系对照组，10uM和50uM处理组各收集l×108细胞，分别加入ImLTrizol抽提RNA,经纯度检测后送康成生物工程奋限公司进行MicroRNA芯片分析。原始数据获得后首先去除背景值后进行归一化分析。筛选与凋亡相关MicroRNA的表达谱。1.6统计学分析采用SPSS
8、13.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差表示，凋亡相关MicroRNA分析以与空白对照组相比，10uM姜黄素处理组表达差异在2倍以上；与10uM姜黄素处理组相比，50uM姜黄素处理组表达差异在2倍以上的MicroRNA,以P<0.05为差异具有统计学意义。1.结果2.1姜黄素对胃癌细胞凋亡的影响采用流式细胞术对不同浓度姜黄素作用48h后的B
