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时间:2018-10-07
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1、硫化砷诱导K562细胞凋亡中Bcl┐2和Bax的表达【关键词】白血病关键词:Bcl-2;砷化物;凋亡;雄黄;白血病,髓样,慢性摘要:目的研究Bcl-2和Bax在硫化砷诱导的K562细胞凋亡中的表达,探讨其在硫化砷诱导的细胞凋亡中的作用.方法K562细胞经一定剂量硫化砷作用特定时间后,MTT法检测细胞生长、增殖状态,光镜及透射电镜下观察细胞形态及凋亡情况,S-P免疫组化染色检测Bcl-2、Bax的表达并进行图像分析.结果硫化砷对K562细胞生长增殖有时间剂量依赖性抑制作用;175~1400μg・L-1硫化砷作用18~144h后,K562细胞出现凋亡
2、细胞的形态学改变;免疫组化染色表明K562细胞低表达Bcl-2蛋白(A值为0.152±0.023,阴性对照A值0.108±0.012),硫化砷处理后对其表达无明显影响(A值为0.138±0.028,P>0.05).硫化砷作用后,Bax蛋白的表达量A值由0.240±0.013增加到0.316±0.021(P<0.01).结论硫化砷可抑制K562细胞的生长和增殖并诱导其发生凋亡,其机制可能与Bax蛋白上调有关. Keyia,myeloid,chronic Abstract:AIMTostudytheexpressionandtheeffectsof
3、Bcl-2andBaxproteininapoptosisofK562cellinducedbyar-senicsulfide.METHODSAfterbeingincubatedinculturemediumcontainingvariablelevelsofarsenicsulfide,cellgroorphologybylightandtransmissionelectronmicroscopy.Theexpression ofBcl-2andBaxproteininedmuno-histochemicalstainningandimaginganaly
4、sis.RESULTSAfterthetreatment,cellgroe-dependentmanner.Morphologically,aftertreatmentefeaturesofapoptosis.ThebaselineBcl-2expressionofK562cellent(A:0.138±0.028)(P>0.05),buttheexpressionofBaxproteininK562cellsco-culturedaybecorrelateda公司.MTT溶液配制同文献[8].鼠抗人Bcl-2,兔抗人Bax均为MaximBiotech,
5、Inc产品,UltraSensitiveTMS-PKit购自福州迈新生物技术开发公司.K562细胞是一种建株于慢性髓细胞白血病急性变患者骨髓细胞的细胞株[9],将细胞以2×108・L-1密度接种于含或不含药物的新鲜RPMI1640完全培养液[内含100mL・L-1小牛血清(杭州四季青产),100×103U・L-1青霉素,100×103U・L-1链霉素]中,在37℃、饱和湿度、含50mL・L-1CO2培养箱中进行培养,隔日换液以保证细胞密度在(2~5)×108・L-1. 1.2
6、方法 1.2.1细胞形态学观察培养细胞经不同浓度硫化砷溶液作用一定时间后,涂片,分别进行TT法检测细胞生长增殖状态将对数生长期细胞以2×108・L-1密度接种于96孔板,试验组加入等体积含各浓度硫化砷的培养液,对照组加入等体积培养液,每组设4个平行孔,并各设空白孔(即只加入药液和培养液,不加细胞)以调零.分别在培养18,42和70h后,加入MTT20μL,继续培养4h,离心,弃去上清,加入DMSO150μL,混匀,570nm处测A值.细胞生长抑制率=(1-处理组A值/对照组A值)×100%.重复3次取平均值. 1.2.3免疫组化检测Bcl-2
7、,Bax表达按照Ultra-SensitiveTMS-PKit说明书操作.细胞滴片经H2O2阻断过氧化物酶活性后,以非免疫性动物血清封闭,分别与一抗(鼠抗人Bcl-2,兔抗人Bax)室温下孵育60min,先后与生物素标记的二抗及链亲和素-过氧化物酶孵育,DAB显色,苏木素复染,光镜下观察.以上各步骤均在室温下进行,各步骤间均以pH7.4的PBS充分漂洗,每次染色均设阴性及阳性对照.结果用北航CMIAS真彩色病理图像分析系统处理,用吸光度平均值(A)代表染色强度. 2结果 2.1细胞的形态学观察175~1400μg・L-1硫化砷作用18~144
8、h后,TT实验发现,硫化砷对K562细
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