硫化砷诱导k562细胞凋亡中bcl┐2和bax的

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1、硫化砷诱导K562细胞凋亡中Bcl┐2和Bax的【关键词】白血病关键词:Bcl-2;砷化物;凋亡;雄黄;白血病，髓样，慢性摘要:目的研究Bcl-2和Bax在硫化砷诱导的K562细胞凋亡中的表达，探讨其在硫化砷诱导的细胞凋亡中的作用.方法K562细胞经一定剂量硫化砷作用特定时间后，MTT法检测细胞生长、增殖状态，光镜及透射电镜下观察细胞形态及凋亡情况，S-P免疫组化染色检测Bcl-2、Bax的表达并进行图像分析.结果硫化砷对K562细胞生长增殖有时间剂量依赖性抑制作用;175～1400μg・L-1硫

2、化砷作用18～144h后，K562细胞出现凋亡细胞的形态学改变;免疫组化染色表明K562细胞低表达Bcl-2蛋白（A值为0.152±0.023，阴性对照A值0.108±0.012），硫化砷处理后对其表达无明显影响（A值为0.138±0.028，P>0.05）.硫化砷作用后，Bax蛋白的表达量A值由0.240±0.013增加到0.316±0.021（P<0.01）.结论硫化砷可抑制K562细胞的生长和增殖并诱导其发生凋亡，其机制可能与Bax蛋白上调有关.　　Keyia，myeloid，chronic　

3、　Abstract:AIMTostudytheexpressionandtheeffectsofBcl-2andBaxproteininapoptosisofK562cellinducedbyar-senicsulfide.METHODSAfterbeingincubatedinculturemediumcontainingvariablelevelsofarsenicsulfide，cellgroorphologybylightandtransmissionelectronmicroscopy.Theexpr

4、ession　ofBcl-2andBaxproteininedmuno-histochemicalstainningandimaginganalysis.RESULTSAfterthetreatment，cellgroe-dependentmanner.Morphologically，aftertreatmentefeaturesofapoptosis.ThebaselineBcl-2expressionofK562cellent（A:0.138±0.028）（P>0.05），buttheexpressi

5、onofBaxproteininK562cellsco-culturedaybecorrelateda公司.MTT溶液配制同文献［8］.鼠抗人Bcl-2，兔抗人Bax均为MaximBiotech，Inc产品，UltraSensitiveTMS-PKit购自福州迈新生物技术开发公司.K562细胞是一种建株于慢性髓细胞白血病急性变患者骨髓细胞的细胞株［9］，将细胞以2×108・L-1密度接种于含或不含药物的新鲜RPMI1640完全培养液［内含100mL・L-1小牛血清（杭州四季青产），1

6、00×103U・L-1青霉素，100×103U・L-1链霉素］中，在37℃、饱和湿度、含50mL・L-1CO2培养箱中进行培养，隔日换液以保证细胞密度在（2～5）×108・L-1.　　1.2方法　　1.2.1细胞形态学观察培养细胞经不同浓度硫化砷溶液作用一定时间后，涂片，分别进行TT法检测细胞生长增殖状态将对数生长期细胞以2×108・L-1密度接种于96孔板，试验组加入等体积含各浓度硫化砷的培养液，对照组加入等体积培养液，每组设4个平行孔，并

7、各设空白孔（即只加入药液和培养液，不加细胞）以调零.分别在培养18，42和70h后，加入MTT20μL，继续培养4h，离心，弃去上清，加入DMSO150μL，混匀，570nm处测A值.细胞生长抑制率=（1-处理组A值/对照组A值）×100%.重复3次取平均值.　　1.2.3免疫组化检测Bcl-2，Bax表达按照Ultra-SensitiveTMS-PKit说明书操作.细胞滴片经H2O2阻断过氧化物酶活性后，以非免疫性动物血清封闭，分别与一抗（鼠抗人Bcl-2，兔抗人Bax）室温下孵育60min，先后与生物素标记

8、的二抗及链亲和素-过氧化物酶孵育，DAB显色，苏木素复染，光镜下观察.以上各步骤均在室温下进行，各步骤间均以pH7.4的PBS充分漂洗，每次染色均设阴性及阳性对照.结果用北航CMIAS真彩色病理图像分析系统处理，用吸光度平均值（A）代表染色强度.　　2结果　　2.1细胞的形态学观察175～1400μg・L-1硫化砷作用18～144h后，TT实验发现，硫化砷对K562细胞生