硫化砷诱导k562细胞凋亡中bcl┐2和bax的表达论文

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1、硫化砷诱导K562细胞凋亡中Bcl┐2和Bax的表达论文.freelia，myeloid，chronicAbstract:AIMTostudytheexpressionandtheeffectsofBcl-2andBaxproteininapoptosisofK562cellinducedbyar-senicsulfide.METHODSAfterbeingincubatedinculturemediumcontainingvariablelevelsofarsenicsulfide，cellgroorphologybylighta

2、ndtransmissionelectronmicroscopy.TheexpressionofBcl-2andBaxproteininedmuno-histochemicalstainningandimaginganalysis.RESULTSAfterthetreatment，cellgroe-dependentmanner.Morphologically，aftertreatmentefeaturesofapoptosis.ThebaselineBcl-2expressionofK562cellent（A:0.138±0.02

3、8）（P0.05），buttheexpressionofBaxproteininK562cellsco-culturedaybecorrelateda公司.MTT溶液配制同文献［8］.鼠抗人Bcl-2，兔抗人Bax均为MaximBiotech，Inc产品，UltraSensitiveTMS-PKit购自福州迈新生物技术开发公司.K562细胞是一种建株于慢性髓细胞白血病急性变患者骨髓细胞的细胞株［9］，将细胞以2×108L-1密度接种于含或不含药物的新鲜RPMI1640完全培养液［内含100mLL-1小牛血清（杭州四季青产），100×

4、103UL-1青霉素，100×103UL-1链霉素］中，在37℃、饱和湿度、含50mLL-1CO2培养箱中进行培养，隔日换液以保证细胞密度在（2～5）×108L-1.1.2方法1.2.1细胞形态学观察培养细胞经不同浓度硫化砷溶液作用一定时间后，涂片，分别进行TT法检测细胞生长增殖状态将对数生长期细胞以2×108L-1密度接种于96孔板，试验组加入等体积含各浓度硫化砷的培养液，对照组加入等体积培养液，每组设4个平行孔，并各设空白孔（即只加入药液和培养液，不加细胞）以调零.分别在培养18，42和70h后，加入MTT20μL，继续培养4h

5、，离心，弃去上清，加入DMSO150μL，混匀，570nm处测A值.细胞生长抑制率=（1-处理组A值/对照组A值）×100%.重复3次取平均值.1.2.3免疫组化检测Bcl-2，Bax表达按照Ultra-SensitiveTMS-PKit说明书操作.细胞滴片经H2O2阻断过氧化物酶活性后，以非免疫性动物血清封闭，分别与一抗（鼠抗人Bcl-2，兔抗人Bax）室温下孵育60min，先后与生物素标记的二抗及链亲和素-过氧化物酶孵育，DAB显色，苏木素复染，光镜下观察.以上各步骤均在室温下进行，各步骤间均以pH7.4的PBS充分漂洗，每次染

6、色均设阴性及阳性对照.结果用北航CMIAS真彩色病理图像分析系统处理，用吸光度平均值（A）代表染色强度.2结果2.1细胞的形态学观察175～1400μgL-1硫化砷作用18～144h后，TT实验发现，硫化砷对K562细胞生长、增殖有明显抑制作用，且此作用呈现明显的剂量及时间依赖性（Tab1）.表1雄黄对K562细胞生长和增殖的抑制率略2.3Bcl┐2和Bax的表达Bcl-2蛋白借其末端一个由19个氨基酸组成的疏水性羧基末端与膜相连，定位于细胞膜、内质网、线粒体膜及核膜上.免疫组化染色表明K562细胞Bcl-2蛋白表达很低，硫化砷处理

7、对其表达无明显影响（Fig1）.图像分析测阴性对照A值为:0.108±0.012，K562细胞Bcl-2蛋白基础表达量A值为0.152±0.023，硫化砷处理后A值为0.138±0.028，无显著性差异（P0.05）.Bax蛋白主要定位于细胞质，K562细胞经硫化砷处理后，Bax染色强度明显增加（Fig2）.图像分析测定硫化砷处理前后，Bax蛋白表达量A值分别为0.240±0.013和0.316±0.021，差异显著（P0.01）.3讨论已有的研究发现CML发病与凋亡受抑有关［9，10］.我们发现，硫化砷在175μgL-1及以上浓度

8、时能抑制K562细胞的生长、增殖并诱导其凋亡，说明在一定剂量下，硫化砷可通过抑制细胞增殖、诱导凋亡而起作用.现已发现许多基因与细胞凋亡有关，包括bcl-2家族、Apo-1/Fas（CD95）、c-myc、白细胞介素-1β转化酶（ICE