苦参碱诱导K562细胞凋亡相关基因bcl┐6表达上调

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1、苦参碱诱导K562细胞凋亡相关基因bcl┐6表达上调作者：张永清　黄高升　郭英　王哲　汤苏阳【关键词】苦参碱;K562细胞　　关键词:苦参碱;K562细胞;bcl-6;凋亡;PCNA　　0引言　　自20世纪80年代即发现苦参碱具有抗鼠肿瘤的活性［1］.最近，有人发现它能抑制人红白血病K562细胞增殖［2］，未见有关引起细胞凋亡及其机制的报道.我们研究发现，苦参碱可诱导K562细胞凋亡相关基因bcl-6表达上调、增殖细胞核抗原（PCNA）表达受抑.　　1材料和方法　　1.1细胞培养人红白血病细胞株K562接种于含100mL・L-1胎牛

2、血清的RPMI1640培养液中，置于37℃、饱和湿度、50mL・L-1CO2孵箱内培养，3d换液、传代1次.4　　1.2药品和试剂苦参碱（matrine）购自西安市天其植物化学药品公司（纯度>0.98，相对分子质量248.36）.抗Bcl-6，PCNA单克隆抗体购自DAKO公司，Westernblot检测试剂盒购自德国BOEHRINGERMANNHEIM公司.　　1.3苦参碱诱导K562细胞实验将处于对数增长期K562细胞分为7组，分别接种于100mL培养瓶内培养（每组105个），1组为空白对照，另6组细胞分别加入0.05，0

3、.1，0.2，0.4和0.5g・L-1苦参碱诱导，每日观察细胞形态，并行细胞计数.诱导第7日提取各组细胞总蛋白，于-20℃保存备用.　　1.4Bcl-6，PCNA检测及凋亡细胞电镜观察将对照组及0.2g・L-1苦参碱诱导组细胞总蛋白提取液定量为1g・L-1，各取样品10μL，采用Westernblot试剂盒检测，按说明操作.对照组及苦参碱诱导组细胞制作常规超薄切片，电子染色，EM-2000EX电镜观察.　　2结果　　2.1不同浓度苦参碱抗K562细胞增殖作用苦参碱诱导K562细胞48h后，0.1g

4、539;L1以上浓度组细胞均显示出增生明显受抑（P<0.01），细胞数与苦参碱浓度呈负相关（r=-0.965），0.4g・L-1和0.5g・L-1组细胞于第5～7日呈负增长.0.2g・L-1浓度组出现部分细胞呈葡萄串样聚集，少数细胞膨出圆形小泡.当浓度大于或等于0.3g・L-1时，上述现象更为明显.4　　2.2Westernblot检测Bcl-6及PCNA结果Westernblot检测显示，对照组Bcl-6阴性，PCNA呈阳性;0.2g・L-1浓度苦参碱诱导K562细胞后

5、，Bcl-6阳性，而PCNA检测结果阴性（图1）.　　2.3苦参碱诱导K562细胞凋亡的电镜观察电镜下见细胞染色质浓集靠边，呈月芽状，一些细胞核染色质和胞膜向细胞外突起，部分脱落形成凋亡小体（图2）.　3讨论　　苦参碱是从豆科槐属植物苦豆子、苦参根中分离得到的生物碱，因其具有抗炎、抗肿瘤及抗心律失常等生物学活性而受到关注［1］.我们通过对对照组K562细胞及苦参碱诱导组K562细胞进行计数，一般形态学观察及Westernblot检测PCNA及Bcl-6蛋白的表达情况，显示苦参碱对K562细胞增殖有显著抑制作用，其抗增殖活性与其浓度呈正相关.PC-

6、NA是DNA聚合酶辅因子，其表达与细胞增殖密切相关［3］.对照组细胞PCNA检测阳性，而苦参碱诱导组为阴性，提示PCNA表达受抑可能是苦参碱抗K562细胞增殖的机制之一.Bcl-6是位于3q27的原癌基因，其产物Bcl-6过表达可引起细胞凋亡［4］.Westernblot检测Bcl-6结果显示，0.2g・L-1苦参碱诱导K562细胞后，使Bcl-6表达上调，光镜和电镜观察细胞出现凋亡的特征性形态改变，说明苦参碱可诱导Bcl-6表达上调，而过表达的Bcl-6可能参与了促使K562细胞凋亡的分子基础.我们的研究表明苦参碱有望成为一种新的

7、有效的白血病细胞凋亡诱导剂.4　　图1略　　图2略　　参考文献:　　［1］陶上乘，王静珍.苦豆子生物碱的药理作用［J］.中国药学杂志，1992;27:201-204.［2］张莉萍，蒋纪恺，张彦etal.苦参碱对K562细胞增殖与分化作用的机制研究［J］.中华血液学杂志，1999;20（6）:315-316.［3］PichA，PontiR，ValerteGetal.MIB-1，Ki67，andPCNAscoresandDNAflowcytometryinintermediategrademadignantlymphomas［J］.JClinPath

8、ol，1994;47:18-22.［4］AlbagliO，LantoineD，QuiefSetal.OverexpressedBcl-6