三氧化二砷诱导胃癌细胞凋亡和bcl-2表型变化的意义

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1、三氧化二砷诱导胃癌细胞凋亡和Bcl-2表型变化的意义作者：郑亦胡，周蒙滔，单云峰，张启瑜【摘要】　　目的：探讨三氧化二砷(As2O3)是否能够诱导SGC7901胃癌细胞凋亡，以及Bcl-2的表型变化是否在其中发挥了作用。方法：将不同浓度的三氧化二砷作用于SGC7901细胞，采用CCK-8进行细胞毒检测；采用DAPI染色进行细胞核形态分析；采用免疫荧光显微镜观察不同表型的Bcl-2表达的变化；采用WesternBlot蛋白印迹法检测Bcl-2的表达。结果：三氧化二砷可以诱导SGC7901细胞凋亡。三氧化

2、二砷诱导SGC7901细胞的凋亡伴随着Bcl-2表型的变化，且Bcl-2的表达无改变。结论：三氧化二砷可能通过Bcl-2表型的变化诱导SGC7901胃癌细胞凋亡，而不是通过下调Bcl-2的表达。【关键词】三氧化二砷胃肿瘤细胞凋亡Bcl-2　　Abstract:Objective:Toexplonetheeffectsofarsenictrioxide(As2O3)oninductionofapoptosisinSGC7901humangastriccancercellsandthephenotypec

3、hangeofBcl-2.Methods:SGC7901humangastriccancercellsweretreatedwithdifferentconcentrationsofarsenictrioxide.CytotoxicitywasmeasuredbyusingtheCellCountingAssayKit-8.Analysisofnuclear10morphologywasobservedwithDAPIstainingandthephenotypechangeofBcl-2wasobs

4、ervedundertheimmunofluorescencemicroscopy.TheexpressionofBcl-2wasexaminedwithWesternBlotanalysis.Results:ArsenictrioxidecouldinduceapoptosisinSGC7901humangastriccancercells，andtheapoptosiswasaccompaniedwithphenotypechangeofBcl-2，butarsenictrioxidedidnot

5、affectexpressionofBcl-2.Conclusion:ArsenicinSGC7901cellsinducedbyarsenictrioxidemaybeexpressedthroughtheinductionofBcl-2phenotpechangeratherthandown-regulationofBcl-2.　　Keywords:arsenictrioxide；stomachneoplams；apoptosis；Bcl-210　　近年来，大量研究证实三氧化二砷在体外对于多种恶性

6、肿瘤细胞具有诱导凋亡作用，包括胃癌、肺癌、乳腺癌、肝细胞癌、鼻咽癌、胆囊癌、宫颈癌和子宫内膜癌[1-2]，但是对于三氧化二砷诱导肿瘤细胞凋亡的作用机制却仍然存在争议。下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达是一种重要的作用机制[2-4]。最新的研究却发现，Bcl-2具有细胞保护和破坏两种表型，其不同的表型被其蛋白构象所调控[5]，这种构象的改变可以使Bcl-2从一个细胞保护作用变成破坏作用。本实验拟研究三氧化二砷是否能够诱导SGC7901胃癌细胞凋亡并观察Bcl-2的表达量和表型的变化，探讨其诱导凋亡的机制。　

7、　1材料和方法　　1.1主要试剂　　三氧化二砷购自哈尔滨伊达药业公司，浓度：10mg/10mL。RPMI1640培养液和胎牛血清购自美国Invitrogen公司。抗Bcl-2N端兔多抗IgG、抗Bcl-2鼠单抗IgG、抗β-actin鼠单抗IgG1购自美国SantaCruz公司。抗Bcl-2BH3结构域抗体购自美国Abgent公司。辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗鼠二抗、Cy3标记的抗兔IgG、DAPI染料购自碧云天生物研究所。CCK-8试剂盒购自日本同仁化学研究所。哺乳动物蛋白抽提试剂购自美国Th

8、ermoScientific公司。聚偏二氟乙烯(PVDF)膜购自美国Millipore公司。ECL化学发光检测试剂盒购自美国Pierce公司。　　1.2细胞培养　　人胃癌细胞株SGC7901购自中科院上海细胞研究所，予含10%胎牛血清的RPMI1640培养液，在5%CO2饱和湿度的37℃孵箱中培养，细胞长满后经胰酶消化法传代。10　　1.3实验设计　　首先使用细胞毒检测求得三氧化二砷作用SGC7901胃癌细胞24h的50%细胞死亡的浓度（IC50），再用