细胞分化剂增强三氧化二砷诱导肝癌细胞的凋亡效应

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1、维普资讯http://www.cqvip.com细胞分化剂增强三氧化二砷诱导肝癌细胞的凋亡效应刘建伟’，唐毅’，沈雁’，钟雪云。，区庆嘉’(1．暨南大学附属广州红十字会医院普外科，广东广州510220；2．暨南大学医学院病理科，广东广州510632；3．中山大学附属第二医院普外科，广东广州510120)摘要：【目的】探讨细胞分化剂(CDA。Ⅱ)在三氧化二砷(As203)诱导肝癌细胞凋亡效应中的作用。【方法】应用CDA一Ⅱ和As203共同处理肝癌细胞株BEL一7402、HepG2，通过四唑蓝比色法检测细胞存活率；用活细胞荧光染色观测细胞凋亡及形态学变化、流式细胞术

2、分析细胞周期变化及凋亡率。【结果】CDA。Ⅱ毒性作用很低，但可以显著增强As203对肝癌细胞生长的抑制作用，1．0g／LCDA一Ⅱ便可使As203对两株细胞的半数抑制浓度由5．0／lmol／L降低至1．0t．tmol／I。(P<0．01)。形态学可观察到CDA。Ⅱ明显加强了As203诱导的细胞凋亡，且与剂量有关；流式细胞术分析，低质量浓度的CDA一Ⅱ(<2．0g／L)细胞生长阻滞于G2期较对照组多，而随着剂量的增加则凋亡细胞和滞留于Gl期的细胞增多，低剂量CDA一Ⅱ与牺03共同处理肝癌细胞后，凋亡率明显高于单独用AS203。【结论】cD艮Ⅱ可增强AS203诱导肝

3、癌细胞的凋亡效应，两药具有协同作用。关键词：癌，肝细胞；凋亡；细胞分裂期；生长抑制物；三氧化二砷中图分类号：R735．2文献标识码：A文章编号：1000—257X(2002)06—0423—04+物钿有三研黧究证罂实其!竺较2某些：是化篓疗曩药黧物誊具銎有竺更望强妄的霎诱兰导1材“料川与一方～法”，肝癌细胞凋亡效应，也有较强的细胞毒性和肿瘤细1．1材料胞耐药性问题⋯1。人尿提取物细胞分化剂(CDA-肝癌细胞株HepG2、BEL一7402来源于中山大Ⅱ)具有较强的诱导肿瘤细胞分化和逆转化疗药耐学医学院细胞库；细胞分化剂(CDA-II，商品名：喜药性的作用[引，临床

4、治疗晚期肝癌发现肝功能好转，滴克)由合肥永生制药有限公司提供；三氧化二砷症状明显改善CDDCDDCDDCDD有利于化疗‘引。我们应用CDA-II和(AS203，M，=197．84)、四甲基偶氮唑蓝(M1vr)和As203共同处理肝癌细胞，旨在探索细胞分化剂与Hoechst33258购自Sigma公司；其他：PRMI1640三氧化二砷在诱导肝癌细胞凋亡效应中的作用。(美国cmco)、琼脂糖、蛋白酶一K、(华美公司)、小牛血清(杭州四季青)、DMSO(二甲基亚砜，进口分装)。维普资讯http://www.cqvip.com424中1jl医科大学学报(AcadJSUM

5、S)，2002，23(6)1．2分组药物培养后，加Hochst33258入细胞悬液，终质量根据预实验的结果1．0～5．0／~mol／L的2浓度为1mg／I，避光染色15min，滴片后在荧光显诱导肝癌细胞的凋亡率有差异性，I．0～5．0g／L微镜观察细胞核DNA荧光。的CDA一1具有抑制肝癌细胞增殖及诱导分化的作1．3．3流式细胞术分析细胞凋亡收集经药物处用。本实验分为A组：对照，只有细胞，不加药物；理4d的细胞，用磷酸缓冲盐溶液(PBS)洗涤，1×B组：单纯加As203，以PRMI1640液稀释，终浓度10细胞乙醇固定，送中山医科大学附属第一医院1．0，2．0，

6、3．0，4．0，5．0／~mol／L5个浓度；C组：单肾病实验室流式细胞仪(美国BECKMAN．纯加CDA一1，以PRMI1640液稀释，终浓度1．0，COULPER)进行细胞周期分析，亚Gl期DNA含2．0，3．0，4．0，5．0g／L5个浓度；D组：A组各浓度量的细胞为凋亡细胞。+1．0g／LCDA一1I。1．4统计学处理1．3方法以SPSS8．0软件，资料均行方差齐性检验，多1．3．1细胞培养及四唑蓝快速比色法(MTT)检因素实验设计资料方差分析的析因分析。测存活率细胞常规培养(37℃、体积分数5％2结果coe饱和湿度)，实验时用PRMI1640液将细胞株

7、浓度调整至1X10。／mI，接种于96孑L培养板上培2．1CDA．1，As20对肝癌细胞生长的影晌养24h，按实验分组加入不同浓度药物，B、C组每As2o3作用肝癌细胞后呈现明显的细胞毒性，孔加100L／L培养液，100L／L药物，总体积200对细胞存活率的影响呈浓度依赖关系，两株细胞的L／L；D组两种药物各加100L／L，总体积200半数抑制浓度是5．0mol／L。而CDA一1的细胞gL／L；对照组每孑L加培养液200L／L。每组浓度毒性很低，在质量浓度1．0g／L时，HepG2、Be1．均为4个复孑L，培养72h后，每孑L加入MTT207402两株细胞存活率

8、分别是92％和89％，质