三氧化二砷与刺五加合用诱导hela细胞凋亡的实验

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1、三氧化二砷与刺五加合用诱导HeLa细胞凋亡的实验【关键词】三氧化二砷；,,刺五加；,,HeLa细胞；,,凋亡　　摘要：目的探讨三氧化二砷与刺五加合用对癌细胞生长的抑制作用及其机理。方法以HeLa细胞的生长抑制情况，流式细胞仪PI单染法检测药物诱导细胞的凋亡状况。结果两药合用24h组细胞变小变圆，脱落情况都较其他组明显，该组细胞生长抑制率明显高于单用组，合用24h组细胞的凋亡率明显高于合用16h和8h组（P＜0.01）。结论刺五加可以作为三氧化二砷的抗癌增效剂，两药合用有很强的抗癌活性，其作用机理与抑制癌细胞生长、诱导其凋亡有关。　　关键词：三氧化二砷；刺五加；HeLa

2、细胞；凋亡　　ExperimentalStudyontheApoptosisofHeLaCellsInducedbyArsenicTrioxideandacanthopanaxsenticosus　　Abstract:ObjectiveToinvestigatetheanti-tumoreffectofArsenictrioxideandAcanthopanaxSenticosusoncarcinomacellsanditsprobablemechanism.MethodsHeLacellsodel.HeLacellsstructuralchangeinedbyinv

3、ertedphasemicroscope.Theinhibitioneffectonthegroicroculturetetrazoliumassay(MTT).Theapoptosisofcellsetry(FCM).ResultsThecellsofthegroupoftedicinesusedtogetherturnedsmallerandrounderthanothergroups.Thegroedicinesusedtogether24hoursprovetheantitumoreffectsofArsenictrioxide,butorestudying.

4、　　Keyl/支，黑龙江省珍宝岛制药有限公司）；亚砷酸注射液（规格10mg/10ml,哈尔滨伊达药业有限公司）；四甲基偶氮唑盐（MTT,Amresco公司）；RPMI1640培养基（美国GIBCO公司）；新生牛血清（杭州四季青生物制品公司）；酶标仪（560型，美国BIORAD公司），流式细胞仪（FACScalibur型，美国BD公司）；数码相机（日本Canon公司）。　　1.2细胞系HeLa细胞，为人宫颈癌细胞系，购自武汉大学中国典型培养物保藏中心（CCTCC）。　　1.3药用浓度的确定　　1.3.1刺五加药用浓度的确定采用MTT法，取对数生长期HeLa细胞，1×10

5、5/ml的细胞100μl至96孔培养板，加入等量不同浓度的刺加五溶液，使各组终浓度分别为0.1，0.5，1，1.5mg/ml，每个浓度组和对照组均设5个重复孔，以加细胞而不加药物组为空白对照组。37℃，5%CO2培养箱培养24h后，取出培养板，弃旧培养液，每孔加入5mg/ml的MTT溶液20μl，37℃继续培养4h，弃培养液，每孔加入DMSO150μl，振荡15min，使结晶物充分溶解，最后在酶标仪上用490nm波长测定各孔的OD值，计算细胞存活率和半数抑制浓度（IC50），从而确定刺五加的用药浓度为0.5mg/ml。　　1.3.2As2O3药用浓度的确定PBS重悬细

6、胞。离心5min去PBS，每管加入1mlPI染液，室温避光反应30min。制备好的细胞悬液经300目尼龙筛网过滤后立即在流式细胞仪上检测，CELLQuest软件获取并分析检测数据。　　1.6细胞形态学观察按上述方法分别让药物作用细胞8，16，24h，然后在倒置显微镜下观察细胞形态变化，并用数码相机照相记录结果。　　2结果　　2.1细胞生长抑制率刺五加与As2O3合用对HeLa细胞增殖有显著的抑制作用。结果见表1。　　表1药物对HeLa细胞的生长抑制率(略)　　c与b比较，P＜0.01，c与a比较，P＜0.01　　2.2HeLa细胞的凋亡分别观察药物作用HeLa细胞8，

7、16，24h的凋亡情况，结果显示两药合用能明显诱导HeLa细胞凋亡，且有明显的时间依赖性（见表2），合用16，24h流式检测出现明显的凋亡峰。见图1。　　a对照组流式b两药合用24h凋亡c两药合用16h凋亡　　图1刺五加与As2O3合用诱导HeLaxl细胞凋亡的流式检测图(略)　　表2药物作用HeLa细胞不同时间的细胞凋亡率(略)　　c与相对应时间a，b各组认及生理盐水组比较，P＜0.01；c24与c8，c16比较P＜0.01；b与相对时间a组和生盐盐组比较，P＜0.05　　3讨论　　细胞凋亡（apoptosis）是机体中普遍存在的重要的生物学事件，