三氧化二砷诱导子宫颈癌hela细胞凋亡的初步研究

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1、三氧化二砷诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡的初步研究【关键词】子宫颈癌摘要:目的：研究三氧化二砷（As2O3）诱导子宫颈癌细胞系HeLa细胞凋亡，探讨As2O3对子宫颈癌的临床应用意义。方法：采用四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测浓度分别为1.0、2.0、5.0、10.0μmol/L的As2O3作用1、2、3、4d后HeLa细胞的存活率，并进行形态学观察；采用细胞凋亡原位检测(TUNEL)法进行细胞凋亡的检测。结果：2.0μmol/LAs2O3处理HeLa细胞48h后,可见细胞的存活率明显降低(P<0.05)，处理96h后，细胞的存活

2、率进一步降低(P<0.01)，经5.0μmol/LAs2O3处理的HeLa细胞24h后就明显可见细胞的存活率降低；As2O3作用后，HeLa细胞具有明显的凋亡特征性改变；TUNEL法检测可发现HeLa细胞有DNA的断裂。结论：As2O3可以诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡，抑制细胞增殖，随着As2O3浓度增加，作用时间延长，效果越明显，其作用具有浓度和时间依赖性。关键词：三氧化二砷；子宫颈癌；HeLa细胞；细胞凋亡Theprimarystudyonprogrammedcelldeathofhumanuterincervicalcanc

3、erinducedbyarsenictrioxideYANGXu,Lalai,LUXiaomei,etal（DepartmentofPathology，XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830054，China）Abstract：Objective：Toinvestigatetheprogrammedcelldeathofhumanuterincervicalcancerinducedbyarsenictrioxide(As2O3)andresearchthearsenictrioxidesignif

4、icanceofclinicalapplication.Methods：Morphlogyinvestigation,MTTreductionassayandinsitucelldeathdetection(TdTmediateDutpnicklabeling,TUNEL)wereadopted.Results：ThesurvivalofHeLacelllinewasinhibitedbyAs2O3.Andatypicalapoptoticmorphlogyalsocouldbeseenduringthecellstreatedw

5、ithAs2O3.MoreoverDNAfragmentationcouldbedetectedbyTUNEL.Conclusion：As2O3caninduceprogrammedcelldeathofHeLacellsandinhibitthecellularproliferation.Theeffectshowstimeandconcentrationdependence.Keywords:arsenictrioxide;cervicalcancer;HeLacells;programmedcelldeath有关研究表明，三

6、氧化二砷(As2O3)治疗急性早幼粒细胞性白血病（APL）具有良好的疗效，并且对全反式维甲酸耐药的患者也有效，国内外已将其用于许多血液系统肿瘤的治疗，其主要机制是诱导肿瘤细胞凋亡［1,2］，但As2O3对实体瘤的作用尚在进一步的探讨中。子宫颈癌为实体瘤，是一种常见的妇科恶性肿瘤，目前治疗以手术为主，但根治术的5年生存率较低，子宫颈癌对放疗的敏感性具有个体差异，且放疗后易出现局部转移和复发，因此寻找有效的子宫颈癌化疗药物具有重要意义。本文研究了As2O3对人子宫颈癌HeLa细胞体外作用的研究，为寻找新的有效治疗子宫颈癌的药物提供理论

7、依据。1材料与方法1.1试剂As2O3(美国Sigma公司)，用超纯水配成1mmol/L的储备液，保存于4℃冰箱中，使用前用培养基稀释至所需浓度；细胞凋亡检测试剂盒(德国BoehringerMannheim公司)；四甲基偶氮唑盐(MTT，美国Sigma公司)，以PBS配制成5mg/ml储备液，于4℃避光保存，工作液浓度0.5mg/ml；DMEM培养基及胎牛血清(FCS，美国Gibco/BRL公司)。1.2细胞培养人子宫颈癌HeLa细胞系(中科院上海细胞所)接种于DMEM培养基(含10%的胎牛血清、100U/ml青霉素、100mg/

8、ml链霉素、2mol/L的谷氨酰胺)，在37℃、饱和湿度为5%的CO2恒温箱里培养，实验选用对数生长期细胞。1.3细胞形态学观察每瓶（10cm2）接种2×105个细胞，24h后用不同浓度（1.0、2.0、5.0、10.0μmol/L）的As2O3(