雌黄(三硫化二砷)诱导HL60细胞凋亡与坏死的实验研究

《雌黄(三硫化二砷)诱导HL60细胞凋亡与坏死的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、雌黄(三硫化二砷)诱导HL-60细胞凋亡与坏死的实验研究【摘要】目的研究雌黄（As2S3）能否诱导急性粒细胞白血病细胞株（HL-60）凋亡与坏死。方法以不同浓度的As2S3在不同的时间处理体外培养的HL-60细胞株，应用细胞生长测定、形态学观察及流式细胞仪检测等多种方法，在体外研究As2S3对HL-60细胞凋亡和增殖抑制的作用。通过对细胞进行AnnexinV和碘化丙锭（PI）双重染色，应用流式细胞仪可以区分活细胞、凋亡细胞与坏死细胞。结果2.5μmol/LAs2S3作用18h后诱导HL-60小部分细胞凋亡和大部分细胞坏死，7.5μmol/LAs2S3作用8h后可

2、引起HL-60细胞凋亡。结论As2S3可诱导HL-60细胞凋亡与坏死，有必要进一步探索其对急性粒细胞白血病治疗的价值。【关键词】雌黄(三硫化二砷)；HL-60细胞；凋亡ExperimentalstudyonAs2S3(Orpiment)inducedapoptosisandnecrosisofhumanleukemiacelllineHL-60【Abstract】ObjectiveThecurrentstudywasdesignedtoinvestigatewhetherAs2S3(Orpiment)willinduceapoptosisandnecrosiso

3、fhumanacutemyloidleukemiacelllineHL-60.MethodsAcuteleukemiacelllineHL-60wasusedasinvitromodel.HL-608celllinewastreatedwithAs2S3atdifferentconcentrationsanddifferentperiod，andcellgrowthwasanalyzedwithtrypanblueexclusion.Apoptosiswasassessedwithcellmorphology（includingmicroscopeandelec

4、tronmicroscope）andflowcytometry，thelattercandistinguishlivecell，apoptoticcellandnecroticcellthroughdoublestainingofAnnexinVandpropidiumiodide，ofwhichfluorescentintensitiesweremeasuredonflowcytometry.Results2.5μmol/LofAs2S3couldinducemostofcellHL-60necrosisandasmallpartofcellapoptosis

5、within18h，7.5μmol/LAs2S3couldinduceapoptosisofhumanleukemiacelllineHL-60within8hours.ConclusionItisnecessarytostudyfurtherthetherapeuticvalueofAs2S3onacutemyloidleukemia.SinceitcaninduceapoptosisandnecrosisofHL-60cell.【Keywords】As2S3(Orpiment)；HL-60cell；Apoptosis8近年来对急性早幼粒细胞白血病（APL）的

6、治疗方面的有关研究取得了重大进展，全反式维甲酸、三氧化二砷以及复方青黛片（主要成分为As4S4）对APL治疗均有较高完全缓解率，尤其后两者对APL治疗作用，主要是通过凋亡来实现的［1］，因此诱发细胞凋亡已成为白血病治疗的新思路。本研究旨在进一步探索中药雌黄(又称黄砷，主要成分为As2S3)在体外对急性粒细胞性白血病细胞株HL-60的凋亡与坏死作用。1材料与方法1.1制剂As2S3（上海化学试剂公司）配成500μmol/L的储存液，过滤灭菌，4℃存放备用，临用前稀释成所需浓度。1.2细胞培养及细胞生长状况测定HL-60细胞（由江苏省血液研究所陈子兴教授惠赠）细胞以

7、2×105/ml接种于RPMI1640培养液（10%胎牛血清，100U/ml青霉素和100mg/ml链霉素）中培养（37℃、5%CO2）。加药后逐日取药物处理组与对照组细胞台盼蓝染色，光镜下计数活细胞总数连续6天，绘制生长曲线。1.2.1细胞形态观察及流式细胞仪测定培养细胞经3.0μmol/LAs2S3孵育一定时间后收集2×106细胞PBS洗2遍，1500r/min离心5min，弃上清，4℃2%戊二醛固定72h后，1%锇酸固定，梯度脱水，EPON-812包埋，超薄切片，铀和铅双重染色后透射电镜下观察。Annexin-V标记按Immuno-tech公司的说明书进行

8、，1×106细胞用冰PB