Hemin诱导K562细胞红系分化过程中BCRabl基因表达的变化及意义

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1、中文摘要HEMIN诱导人白血病细胞K562红系分化过程中BCR/ABL的变化及其意义背景及目的目前，对于高铁血红素（Hemin）诱导人白血病K562细胞可以导致其向红系分化已经研究的十分明确，关于这一过程中比较明确的机制是利用高铁血红素（Hemin）促进红系特异性转录因子或辅因子的表达,但该过程中K562细胞的特异性融合基因BCR/ABL有无变化国内外尚未见明确报道。本研究拟通过建立应用高铁血红素（Hemin）诱导K562细胞红系分化的模型，从而从宏观上（包括细胞形态的改变、细胞活性的改变），微观上（蛋白和基因水平上）分别探究这一过程中K562细

2、胞所发生的变化及BCR/ABL融合基因的表达变化,以期待对于白血病细胞的红系分化的内在调控作进一步研究，并为酪氨酸激酶抑制剂（TyrosineKinaseInhibitor,TKI）耐药的患者治疗提供新的思路。方法1.分别应用不同浓度的高铁血红素（Hemin）（0、10、20、30、40、50μmol/L）刺激K562细胞24小时诱导其红系分化，光学显微镜下观察Hemin诱导前后K562细胞的形态变化；2.联苯胺染色法验证Hemin诱导K562细胞红系分化；3.采用CCK-8法分别检测0、10、20、30、40、50μmol/L浓度的Hemin诱

3、导24小时后K562细胞的增殖活性；4.分别提取不同浓度组细胞的RNA及蛋白后做实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR)及蛋白质印迹分析（WesternBlot）分别从基因和蛋白水平检测各组细胞中BCR/ABL融合基因的表达情况。结果人白血病K562细胞经过不同浓度的Hemin（0、10、20、30、40、50μmol/L）的诱导24小时后，细胞形态与对照组相比体积变大，核浆比例减少，胞质增多；进行CCK-8活性检测发现各组细胞的增殖活性较对照组降低；将不同浓度的Hemin诱导后的K562细胞24小时后提取RNA进行实时荧光定量PCR检测发现B

4、CR/ABL融合基因的表达下调且下调的程度与Hemin的浓度成正比；提取不同浓度Hemin诱导24小时后的K562细胞的蛋白，进行WesternBlot分析发现随着Hemin浓度的升高融合基因蛋白的表达量逐渐减低。结论Hemin在诱导K562细胞红系分化过程中可BCR/ABL融合基因的表达明显受到抑制，且作用呈Hemin浓度依赖性。关键词：氯高铁血红素；K562细胞；红系分化；BCR/ABL融合基因ABSTRACTChangesandSignificancesofBCR/ABLExpressionDuringErythroidDifferenti

5、onofK562InducedbyHeminBackgroundandPurposeAtpresent,ithasbeenwell-establishedthatHemin-inducedhumanleukemiaK562cellscanleadtoitsdifferentiationintoerythroid,andamorespecificmechanisminthisprocessistheuseofHemintopromoteerythroid-specifictranscription.Theexpressionoffactorsorc

6、ofactors,butwhetherthespecificfusiongeneBCR/ABLofK562cellshaschangedduringtheprocesshasnotbeenclearlyreportedathomeandabroad.ThisstudyintendstoestablishamodeloferythroiddifferentiationinK562cellsbyusinghemin,sothatmacroscopicalchanges(includingchangesincellmorphologyandchange

7、sincellviability)andmicroscopically(proteinandgenelevels)canbeexploredseparately.ThechangesinK562cellsandthechangesinBCR/ABLfusiongeneexpressionduringthecourseofthestudywerefurtherstudiedinanticipationoftheintrinsicregulationoftheerythroiddifferentiationofleukemiacells,andinp

8、atientswithtyrosinekinaseinhibitor(TKI)resistance.Treatmentprovidesn