维生素a诱导成纤维细胞内视黄酸受体γ基因的表达变化研究

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1、-‘T●lORICULTUHAE华北农学报·2009，24(增刊)：15—17DOREgLI-SIHI∞维生素A诱导成纤维细胞内视黄酸受体基因的表达变化研究张冬杰，刘娣(黑龙江省农业科学院，黑龙江哈尔滨150086)摘要：采用半定量RT-PCR技术检测分析了在体外培养的猪成纤维细胞内分别添加终浓度为0．5，5，10，30tg／gL的维生素A后，分别作用12，24，48和72h后，视黄酸受体7基因(RAR7)的表达变化情况。结果表明，不同浓度组间差异不显著，但是分别作用24和72h后，会出现抑制RAR7基因表达的现象。关键词：猪；视黄酸受体7基因；成

2、纤维细胞；RT-PCR中图分类号：Q786文献标识码：A文章编号：1000—7091(2009)增刊一0015—03RetinoicAcidReceptor丫ExpressionIsInducedinFibroblastCellbyVitaminAZHANGDong—jie，LIUDi(HeilongjiangAcademyofAgricultureSciences，Harbin150086，China)Abstract：Inthepresentstudy，RAR7expressionwasdeterminedbyRT-PCRinfibroblas

3、tcellsculturedinaddition-al0．5，5，10，30g／LvitaminAmediaandcultured12，24，48and72hrespectively．Theresultsshowedthatdiferentconcentrationhadnodiference，butafterafected24and72hrespectively，itwouldappearinginhibitionphenomenan．Keywords：Pig；Retinoicacidreceptor7；Fibroblastcell；RT-PCR

4、视黄酸(Retinoicacid，RA)是一种脂溶性的小分一物种内3个受体的保守性，这一研究结果说明，子物质(300kDa)，属于VitA的衍生物一类维生素，RAR的3个亚型可能行使着不同的功能。RARr在是细胞分化和组织形态发生的主要调节因子，在上人和鼠的皮肤中都是优势表达的RAR[3J。本研究以皮细胞的生长、细胞分化、视觉、组织维持、胎儿发育体外培养的猪耳皮成纤维细胞为试验材料，采用半定和繁殖等过程中发挥着重要作用。RA的这种多效量RT-PCR方法检测和分析了不同浓度的维生素A性被认为是由属于配基诱导转录调节因子超家族的以及不同作用时间对RA研

5、基因的表达影响。两类受体家族介导的。这两种RA受体家族即BAR1材料和方法(Retinoicacidreceptor)和RXR(Retinoidxreceptor)，都是类固醇．甲状腺受体基因超家族的成员，都有三种1．1成纤维细胞体外培养亚型(a、J3、)，在不同组织发育阶段不同程度地表在超净台上，用PBS液将所取的耳组织块漂洗达，RA作用的发挥要借助于这些RARs和RXRs反3～5次，剪成1胁3左右的小块，加入微量的含式作用因子的调节uJ。20％胎牛血清的D．MEM／F．12(Gibco)培养液，于RAR受体家族的第3个受体是视黄酸受体基39℃饱

6、和湿度CO2培养箱中培养5h左右，补加培因(Retinoieacidreceptor，RA／tr)，最先在鼠中发现，养液，之后隔天换液1次。待细胞基本汇合后，吸去主要在皮肤中检测到它的RNA。Krust等用鼠的培养液，PBS清洗，加2mL消化液消化2—3min，终止cDNA克隆了人的相似基因，氨基酸序列比较分析发消化后，l000r／rain离心5min，制成细胞悬液，接种现，RARa，脚和RAR7在种间的保守性要远高于同于直径60rain的培养皿中培养，每2d更换1次培养收稿日期：2009—03一l8基金项目：黑龙江省博士后基金(LRB07—392

7、)作者简介：张冬杰(1980一)，女，黑龙江哈尔滨人，助理研究员，博士，主要从事猪的分子遗传育种研究。通讯作者：刘娣(1963一)，女，吉林长春人，博士，教授，博士生导师，主要从事动物遗传育种与繁殖的研究。^CT-1ORICULI'URAE16华北农学报24卷DOREJILI-SIHI曲液。传至第3代时，加入维生素A(Sigma)，使其终浓代RNA样品和RT产物作为对照，以检验是否有基度分别为0．5，5，l0，30g／，待生长到12，24，48和因组和外源DNA污染，并用混合样品(待测样品等72h时，分浓度收获细胞，每组设1个阴性对照。比例混合)来

8、建立最佳反应条件(处于指数增长期的1．2RT．PCR检测RARy循环参数)和校正不同批次间的差异。1．2．1总RNA抽提使