阿魏酸钠抑制高糖诱导系膜细胞表达pai

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1、阿魏酸钠抑制高糖诱导系膜细胞表达PAI：桂华珍罗华石明隽肖瑛郭兵张国忠【摘要】目的：观察阿魏酸钠（SF）对高糖诱导系膜细胞（GMC）表达PAI-1蛋白和细胞信号转导分子p38MAPK的影响。方法：原代培养大鼠肾小球系膜细胞，分为正常组、甘露醇组、高糖组、高糖加不同浓度SF组，分别于处理后24h、48h收集细胞。用免疫细胞化学检测各组细胞p38MAPK的表达，流式细胞术检测PAI-1蛋白。结果：48h内，高糖促进PAI-1和p38MAPK蛋白的表达，而SF能明显抑制高糖的这种作用，其作用随SF浓度的增加和作用时间的延长而加强。结论：SF能拮抗髙糖诱导的GMC表达PAI-

2、1增多和抑制p38MAPK信号通路。【关键词】糖尿病肾病；葡萄糖；有丝分裂素激活蛋白激酶类；纤溶酶原激活物抑制物1；系膜细胞；阿魏酸钠［Abstract］Objective:Toobservetheinfluenceofsodiumferulate(SF)onPAI-1andp38MAPKproteinexpressionofmesangialcellsinincubationmediumarilyculturedglomerularmesangialcells(GMCs)alglucosegroup,mannitolgroup,highglucosegroupand

3、highglucoseplusSFgroupsofetryandthatofp38MAPKproteinmunocytochemistrymethods.Results:HighglucosesignificantlypromotedtheexpressionofPAI-1andp38MAPKofGMCsotionofPAI-1andp38MAPKproteininducedbyhighglucose,andtheinhibitoryeffectincreasedalonge.Conclusion:SFcaninhibittheincreaseofPAI-1prote

4、inandtheactivationofp38MAPKsignalpathitagen-activatedproteinkinases;plasminogenactivatorinhibitor1;mesangialcell;sodiumferulate糖尿病肾病（diabeticnephropathy，DN）的发病机制十分复杂，至今尚未完全阐明，目前认为显著的高血糖引起的肾小球系膜细胞（glomerularmesangialcell，GMC）分泌细胞外基质（ECM）成分增多在早期肾小球肥大和晚期肾小球硬化的病理改变中起关键作用[1]。ECM在肾小球沉积受纤溶酶等蛋白

5、分解酶类和其抑制物的共同作用，纤溶酶原激活物抑制剂（PAI）可以抑制ECM降解而促进其沉积[2]。丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）是重要的细胞内信号转导物，已有研究表明可能介导DN的发病，其中p38MAPK在DN发病机制中起重要作用[3，4]。阿魏酸钠(sodiumferulate,SF)是一种内皮素拮抗剂，具有广泛的药理作用，已有用其治疗糖尿病肾病取得良好效果，然而其作用机理尚未完全阐明[5]。2006年4月~2007年12月用原代培养GMC，观察高糖培养环境中GMC表达PAI-1和p38MAPK蛋白的变化以及阿魏酸钠对其影响，为进一步了解SF治疗DN的作用机制提供实

6、验依据。1材料和方法1.1材料1.1.1主要试剂阿魏酸钠（吉林西点药业科技发展股份有限公司）；甘露醇（石家庄制药有限公司）；MEM培养基（美国Gibco公司）；L-谷氨酰胺、4-甲基偶氮唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)、胰蛋白酶（美国Sigma公司）；胎牛血清(FCS，Hyclone公司)；抗PAI-1抗体、抗p38MAPK抗体、SABC试剂盒（武汉博士德）。1.1.2主要仪器设备CO2孵箱（美国REVCO）；倒置显微镜(OLYMPUS)；流式细胞仪（美国BD公司）；CM-2000B型生物医学图像分析系统(北京)。1.2方法1.2.1大鼠原代肾小球系膜细胞培养大

7、鼠双肾灌洗后，分级筛网滤过分离肾小球，用Ⅳ型胶原酶消化处理，种植法体外培养。培养细胞按已建立的方法鉴定，确定为系膜细胞，取第3~4代细胞供实验用[6]。1.2.2实验分组正常组（5.5mmol/LD-葡萄糖）；SF加正常糖培养组（SF240mg/L加5.5mmol/LD-葡萄糖）；甘露醇组（5.5mmol/LD-葡萄糖加24.5mmol/L甘露醇组)；高糖组（30mmol/LD-葡萄糖）；SF加高糖培养组（SF60、120、240mg/L加30mmol/LD-葡萄糖）。各组分别于培养24h和48h时收集细胞用于检测。1.2.3用台盼蓝染色，检测存活细