阿魏酸钠抑制高糖诱导的系膜细胞增殖论文

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1、阿魏酸钠抑制高糖诱导的系膜细胞增殖论文石明隽罗华肖瑛桂华珍郭兵张国忠【摘要】目的探讨阿魏酸钠(SF)对高糖诱导的原代培养系膜细胞(GMC)增殖的作用及其机制。方法原代培养肾小球系膜细胞，分为正常组、甘露醇组、高糖组、高糖加不同浓度SF组，分别于处理后24、48h收集细胞。用MTT法检测细胞增殖；流式细胞术测定cyclinD1和细胞周期；免疫细胞化学检测p53蛋白的表达。结果48h内，高糖促进GMC增殖，使GMC由G1期进入S期细胞比例增高；同时cyclinD1蛋白表达上调而p53蛋白的表达减少；SF能明显对抗高糖的这种作用，其作用随SF浓度的增加、作用时间

2、的延长而加强。结论SF可能通过抑制cyclinD1蛋白表达和促进p53蛋白生成，从而抑制高糖诱导的GMC增殖。【关键词】系膜细胞；高葡萄糖；阿魏酸钠；细胞周期；cyclinD1；p53【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectsandmechanismofsodiumferulate(SF)ontheproliferationofmesangialcellsinducedbyhighglucose.MethodsTheprimaryglomerularmesangialcellsal,mannitol,highglo

3、ucoseandhighgloucoseplusdifferentconcentrationSFgroups.CellseasuredbyMTTassay,andcellcycleandcyclinD1easuredthroughfloetry.p53proteinexpressionmunocytochemistry.ResultsHighglucosesignificantlypromotedmesangialcellproliferationandupregulatedtheexpressionofcyclinD1,.freelesangialce

4、llproliferationinducedbyhighglucoseedependedmanner.ConclusionsSFcaninhibitproliferationofmesangialcellsinducedbyhighglucosebysuppressingthecyclinD1expressionandincreasingthelevelofp53proteinpossibly.【Keyferulate;CyclinD1;p53糖尿病肾病(DN)的发病机制十分复杂，至今尚未完全阐明.freela公司)；胎牛血清(FCS，Hyclone)；

5、抗cyclinD1抗体、p53抗体、SABC试剂盒(武汉博士德)。CO2孵箱(美国REVCO)；倒置显微镜(OLYMPUS)；酶标仪(美国BioRad)；流式细胞仪(美国BD)；CM2000B型生物医学图象分析系统(北航)。1.2方法1.2.1大鼠原代GMC培养大鼠双肾灌洗后，分级筛网滤过分离肾小球，并用Ⅳ型胶原酶消化处理，种植法体外培养大鼠肾小球系膜细胞。培养细胞按已建立的方法鉴定〔7〕，确定为系膜细胞，供实验用。1.2.2实验分组正常组(5.5mmol/LD葡萄糖)；SF+正常组(SF240mg/L＋5.5mmol/LD葡萄糖)；甘露醇组(5.

6、5mmol/LD葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇)；高糖组(30mmol/LD葡萄糖)；SF+高糖培养组(SF60、120、240mg/L+30mmol/LD葡萄糖)。各组分别于培养24和48h时收集细胞用于检测。1.2.3MTT法检测系膜细胞增殖将原代GMC分组，每组三复孔，细胞周期同步后，SF作用20h和44h，每孔加入MTT(5mg/ml)20μl，继续作用4h，去上清，然后每孔加入DMSO200μl，轻微振荡30min，酶标仪570nm处测光吸收值(A)。用台盼蓝染色，检测存活细胞数。1.2.4流式细胞仪检测肾小球系膜细胞的细胞周期调整GM

7、C数为5×105个/ml，接种于50ml培养瓶中，加入适量的含10％FCS的MEM培养基培养，孵育到亚融合状态，改用无血清培养液孵育24h，使细胞处于相对静止期(G1期)。分别于24和48h收集制成单细胞悬液，PBS洗涤2次，用PBS调节细胞数为1×106个/ml，分装于6个EP管中(1ml/管)，无水乙醇固定，加人RNA酶Ⅰ孵育后，流式细胞仪对细胞周期进行检测，MCYCLE软件分析细胞周期。1.2.5流式细胞仪测定cyclinDl的表达水平按1.2.4步骤收集各组细胞，无水乙醇固定，加入0.5ml0.1%TritonX100，每组12管细胞随机分为6管

8、阴性对照，6管实验组，对照组加入50μl生理盐水代替一抗，实验组分