egcg对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖及炎症因子调

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1、EGCG对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖及炎症因子调【摘要】目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖及炎症因子（MCP1和ICAM1）分泌的影响。方法通过体外培养的大鼠系膜细胞进行研究。设立低糖对照组（NG）和高糖组（HG、E100、E200、E400，为分别含EGCG0、100、200、400μg·L-1），分别培养12、24、48h。CCK细胞计数法检测不同浓度EGCG作用下大鼠系膜细胞的OD值，判断细胞增殖情况。采用ELISA方法检测培养细胞上清中MCP1和ICAM1蛋白浓度。结果EGCG能抑制

2、高糖时系膜细胞的增殖活性，其抑制作用呈剂量和时间依赖的方式。系膜细胞处于高糖环境时，MCP1和ICAM1蛋白表达上调，低浓度的EGCG对MCP1和ICAM1蛋白的抑制效果不明显，高浓度的EGCG能明显抑制MCP1和ICAM1的分泌。结论在体外高糖条件下，大鼠系膜细胞在48h内以增殖为主，一定浓度的EGCG可抑制其增殖。EGCG可在蛋白水平抑制高糖刺激的大鼠系膜细胞MCP1和ICAM1的分泌。【关键词】糖尿病肾病；系膜细胞；单核细胞趋化蛋白1；细胞间粘附分子1；表没食子儿茶素没食子酸酯ABSTRACT：Objectiv

3、eToexploretheeffectsofepigallocatechin3gallate(EGCG)onproliferationofmesangialcellsandthecontentsofMonocytechemoattractantprotein1(MCP1)andintercellularadhesionmolecule1(ICAM1)inhighglucoseculturedratmesangialcells.MethodsRatmesangialcellsmol·L-1entgroups(highgluco

4、se25mmol·L-1esangialcellseasuredbyCCK8methods.ThelevelsofMCP1andICAM1insupernatantinedbyenzymelinkedimmunosorbantassay(ELISA).ResultsTheresultsshoiastimulatedmesangialcellproliferationandreleaseofMCP1andICAM1.EGCGcouldinhibitcellgroedependentmanner.Inaddition,high

5、concentrationsofEGCGcouldalsodecreasethelevelsofMCP1andICAM1insupernatant.ConclusionEGCGcansignificantlyinhibitproliferationandsecretionofMCP1andICAM1inhighglucoseinducedratmesangialcells.KEYesangialcell;Monocytechemoattractantprotein1;Intercellularadhesionmolecule

6、1;Epigallocatechin3gallate糖尿病肾病（DN）是糖尿病特有的慢性微血管并发症，其病变周围常有大量单核/巨噬细胞浸润，后者与细胞粘附分子及化学趋化因子有关。SassyPrigent等[1]证实在链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病大鼠模型中，肾小球表达过量的细胞间粘附分子1(ICAM1)、VCAM1及单核细胞趋化蛋白1(MCP1)等细胞因子，导致单核巨噬细胞浸润，随后出现IV型胶原链mRNA增加，系膜细胞面积增加及肾小球肥大。说明糖尿病状态下肾组织中粘附分子、趋化因子导致早期单核/巨噬细胞浸润在致肾小球

7、硬化中起着重要作用。表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin3gallate,EGCG）为绿茶中的一种有效成分。茶多酚具有清除自由基、抗脂质过氧化、抗突变、抗肿瘤、抗炎、抗病毒和增强机体免疫功能等多种生物学效应，对肥胖、糖尿病、肿瘤等多种疾病均有明显的药理作用。本实验采用高糖环境下培养的大鼠肾小球系膜细胞，探讨EGCG干预后对系膜细胞增殖及炎症因子ICAM1和MCP1蛋白影响，初步探索EGCG对糖尿病肾病的保护机制。1材料和方法1.1材料大鼠肾系膜细胞株HBZY1（中国典型动物保藏中心提供），培养于含10％胎

8、牛血清（FCS）的正常糖DMEM中，常规置于37℃、5％CO2培养箱中孵育，用0.25％胰蛋白酶消化传代，每周传代2～3次。EGCG购自Sigma公司，纯度98%；正常葡萄糖（含5.5mmol·L-1D葡