金雀异黄素对高糖培养下大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响

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1、金雀异黄素对高糖培养下大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响作者:孙莉静,袁伟杰,张小瑛,梅小斌,郭志勇,陈光椿,张军【关键词】细胞凋亡EffectofgenistEinonapoptosisandproliferationofratmesangialcellsculturedinhighglucose  【Abstract】AIM:ToevaluatetheeffectofdifferentconcentrationsofgenistEInontheproliferationandapoptosisofratmesangialcellsculturedinvitroinhighglucose.ME

2、THODS:Mesangialcellsentalgroups(highglucose4.5g/Lol/L)easuredbyMTTmethod.AgarosegelelectrophoresisofDNAextractedfromdifferentgroups,theterminaldeoxynucleotidyltransferasemediateddUTPnickendlabeling(TUNEL)techniqueandfloetryusingpropidiumiodidestainingedtoidentifyorquantifytheapoptosisofcells.RESUL

3、TS:Quantitativeanalysisofapoptoticcellsshoesangialcellstreatedol/Lgenisteingroupsthanthatinnormalcontrolgroup(P<0.05).Nosignificantdifferenceofthegrool/Lgenisteingroups.Thecellapoptoticrateincreasedinapositivemannerofgenisteinconcentrationandcultureduration.CONCLUSION:Genisteinhasanintrinsiccap

4、abilityofinhibitingtheproliferationandinducingtheapoptosisofmesangialcellsinculturedhighglucoseandtheseeffectsareinagenisteinconcentrationandtimedependentmanners.  【Keyol/L金雀异黄素),各组分别培养12,24,36,48h.氮蓝四唑盐(MTT)法检测MC的增殖情况,DNA琼脂糖电泳、末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法、流式细胞术3种方法检测细胞凋亡情况.结果:10,30,50μmol/L金雀异黄素作用2

5、4h可明显诱导细胞凋亡(P<0.05),而0,1,5μmol/L作用不显著.随着金雀异黄素浓度的增加,凋亡比例增加;同一浓度的金雀异黄素随着作用时间的延长,凋亡比例亦增加.结论:一定浓度的金雀异黄素在体外高糖培养条件下,可抑制大鼠MC增殖,促进其凋亡,且与其浓度和作用时间有关.  【关键词】金雀异黄素;细胞增殖;细胞凋亡  0引言  糖尿病肾病(diabeticnephropathy,DN)是糖尿病最常见和严重的并发症之一,是造成终末期肾衰的主要病因,具体发病机制目前尚不清楚.近年发现大豆及大豆蛋白具有加速脂质清除、抗动脉粥样硬化、抗氧化等生物功效[1],这些作用与其中所含的多酚类混

6、合物-大豆异黄酮密切相关.肾脏血管病变、高脂血症和氧自由基等是DN发生和发展的重要因素,大豆异黄酮的上述功能,暗示了它们可能对肾脏细胞具有良好的保护作用[2].目前此类物质对肾脏细胞直接影响的报道较少.肾脏系膜细胞(mesangialcell,MC)是致病因子作用的主要靶细胞.我们研究大豆异黄酮的主要生理活性成分―金雀异黄素对高糖培养下大鼠MC生长的影响如下.  1材料和方法  1.1材料  大鼠MC株38℃水浴复苏,生长于含60mL/L胎牛血清的低糖DMEM培养液中,7d左右达融合状态,实验采用传代的第3代MC,进入实验后无血清(5mL/L)培养,分别在金雀异黄素作用的12,24,36和

7、48h终止培养.实验分为对照组:低糖无血清DMEM培养液(葡萄糖浓度1g/L不含金雀异黄素);实验组:高糖无血清DMEM培养液(葡萄糖浓度4.5g/L金雀异黄素浓度为0,1,5,10,30和50μmol/L),空白对照组只加培养液无细胞.Genistein购自Sigma公司(Mr270.2,纯度≥98%),取Genistein5mg溶于1.85mL二甲基亚砜(DMSO)中,配成1×10-2mol/L母液,实验时按需要稀释

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