金雀异黄素对高糖培养下大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响

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1、金雀异黄素对高糖培养下大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响作者：孙莉静，袁伟杰，张小瑛，梅小斌，郭志勇，陈光椿，张军【关键词】细胞凋亡EffectofgenistEinonapoptosisandproliferationofratmesangialcellsculturedinhighglucose　　【Abstract】AIM:ToevaluatetheeffectofdifferentconcentrationsofgenistEInontheproliferationandapoptosisofratmesangialcellsculturedinvitroinhighglucose.ME

2、THODS:Mesangialcellsentalgroups(highglucose4.5g/Lol/L)easuredbyMTTmethod.AgarosegelelectrophoresisofDNAextractedfromdifferentgroups,theterminaldeoxynucleotidyltransferasemediateddUTPnickendlabeling(TUNEL)techniqueandfloetryusingpropidiumiodidestainingedtoidentifyorquantifytheapoptosisofcells.RESUL

3、TS:Quantitativeanalysisofapoptoticcellsshoesangialcellstreatedol/Lgenisteingroupsthanthatinnormalcontrolgroup(P<0.05).Nosignificantdifferenceofthegrool/Lgenisteingroups.Thecellapoptoticrateincreasedinapositivemannerofgenisteinconcentrationandcultureduration.CONCLUSION:Genisteinhasanintrinsiccap

4、abilityofinhibitingtheproliferationandinducingtheapoptosisofmesangialcellsinculturedhighglucoseandtheseeffectsareinagenisteinconcentrationandtimedependentmanners.　　【Keyol/L金雀异黄素），各组分别培养12，24，36，48h.氮蓝四唑盐（MTT）法检测MC的增殖情况，DNA琼脂糖电泳、末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法、流式细胞术3种方法检测细胞凋亡情况.结果：10，30，50μmol/L金雀异黄素作用2

5、4h可明显诱导细胞凋亡（P<0.05），而0，1，5μmol/L作用不显著.随着金雀异黄素浓度的增加，凋亡比例增加；同一浓度的金雀异黄素随着作用时间的延长，凋亡比例亦增加.结论：一定浓度的金雀异黄素在体外高糖培养条件下，可抑制大鼠MC增殖，促进其凋亡，且与其浓度和作用时间有关.　　【关键词】金雀异黄素；细胞增殖；细胞凋亡　　0引言　　糖尿病肾病（diabeticnephropathy,DN）是糖尿病最常见和严重的并发症之一，是造成终末期肾衰的主要病因，具体发病机制目前尚不清楚.近年发现大豆及大豆蛋白具有加速脂质清除、抗动脉粥样硬化、抗氧化等生物功效［1］，这些作用与其中所含的多酚类混

6、合物－大豆异黄酮密切相关.肾脏血管病变、高脂血症和氧自由基等是DN发生和发展的重要因素，大豆异黄酮的上述功能，暗示了它们可能对肾脏细胞具有良好的保护作用［2］.目前此类物质对肾脏细胞直接影响的报道较少.肾脏系膜细胞（mesangialcell,MC）是致病因子作用的主要靶细胞.我们研究大豆异黄酮的主要生理活性成分―金雀异黄素对高糖培养下大鼠MC生长的影响如下.　　1材料和方法　　1．1材料　　大鼠MC株38℃水浴复苏，生长于含60mL/L胎牛血清的低糖DMEM培养液中，7d左右达融合状态，实验采用传代的第3代MC，进入实验后无血清（5mL/L）培养，分别在金雀异黄素作用的12，24，36和

7、48h终止培养.实验分为对照组：低糖无血清DMEM培养液（葡萄糖浓度1g/L不含金雀异黄素）;实验组：高糖无血清DMEM培养液（葡萄糖浓度4.5g/L金雀异黄素浓度为０，1，5，10，30和50μmol/L），空白对照组只加培养液无细胞.Genistein购自Sigma公司（Mr270.2，纯度≥98%），取Genistein5mg溶于1.85mL二甲基亚砜（DMSO）中，配成1×10-2mol/L母液，实验时按需要稀释