金雀异黄素对高糖培养下大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响论文

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1、金雀异黄素对高糖培养下大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响论文孙莉静，袁伟杰，张小瑛，梅小斌，郭志勇，陈光椿，张军【关键词】细胞凋亡Effectofgenisteinonapoptosisandproliferationofratmesangialcellsculturedinhighglucose【Abstract】AIM:Toevaluatetheeffectofdifferentconcentrationsofgenisteinontheproliferationandapoptosisofratmesangialcellsculturedinvi

2、troinhighglucose.METHODS:Mesangialcellsentalgroups(highglucose4.5g/Lol/L)easuredbyMTTmethod.AgarosegelelectrophoresisofDNAextractedfromdifferentgroups,theterminaldeoxynucleotidyltransferasemediateddUTPnickendlabeling(TUNEL)techniqueandfloetryusingpropidiumiodidestainingedtoid

3、entifyorquantifytheapoptosisofcells.RESULTS:Quantitativeanalysisofapoptoticcellsshoesangialcellstreatedol/Lgenisteingroupsthanthatinnormalcontrolgroup(P0.05).Nosignificantdifferenceofthegrool/Lgenisteingroups.Thecellapoptoticrateincreasedinapositivemannerofgenisteinconcentrat

4、ionandcultureduration.CONCLUSION:Genisteinhasanintrinsiccapabilityofinhibitingtheproliferationandinducingtheapoptosisofmesangialcellsinculturedhighglucoseandtheseeffectsareinagenisteinconcentrationandtimedependentmanners.【Keyol/L金雀异黄素），各组分别培养12，24，36，48h.氮蓝四唑盐（MTT）法检测MC的增殖情况，

5、DNA琼脂糖电泳、末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法、流式细胞术3种方法检测细胞凋亡情况.结果：10，30，50μmol/L金雀异黄素作用24h可明显诱导细胞凋亡（P0.05），而0，1，5μmol/L作用不显著.随着金雀异黄素浓度的增加，凋亡比例增加；同一浓度的金雀异黄素随着作用时间的延长，凋亡比例亦增加.结论：一定浓度的金雀异黄素在体外高糖培养条件下，可抑制大鼠MC增殖，促进其凋亡，且与其浓度和作用时间有关.【关键词】金雀异黄素；细胞增殖；细胞凋亡0引言糖尿病肾病（diabeticnephropathy,DN）是糖尿病最常见

6、和严重的并发症之一，是造成终末期肾衰的主要病因，具体发病机制目前尚不清楚.近年发现大豆及大豆蛋白具有加速脂质清除、抗动脉粥样硬化、抗氧化等生物功效［1］，这些作用与其中所含的多酚类混合物－大豆异黄酮密切相关.肾脏血管病变、高脂血症和氧自由基等是DN发生和发展的重要因素，大豆异黄酮的上述功能，暗示了它们可能对肾脏细胞具有良好的保护作用［2］.目前此类物质对肾脏细胞直接影响的报道较少.肾脏系膜细胞（mesangialcell,.freelL/L胎牛血清的低糖DMEM培养液中，7d左右达融合状态，实验采用传代的第3代MC，进入实验后无血清（5mL/L）

7、培养，分别在金雀异黄素作用的12，24，36和48h终止培养.实验分为对照组：低糖无血清DMEM培养液（葡萄糖浓度1g/L不含金雀异黄素）;实验组：高糖无血清DMEM培养液（葡萄糖浓度4.5g/L金雀异黄素浓度为０，1，5，10，30和50μmol/L），空白对照组只加培养液无细胞.Genistein购自Sigma公司（Mr270.2，纯度≥98%），取Genistein5mg溶于1.85mL二甲基亚砜（DMSO）中，配成1×10-2mol/L母液，实验时按需要稀释成各浓度工作液.细胞凋亡检测试剂盒购自宝灵曼公司，细胞周期检测试剂盒购自Becto

8、nDickinson公司，噻唑蓝(MTT)购自上海华舜生物试剂公司.1．2方法1．2．1MTT法检测细胞增殖MC生长于96孔培养板（1×