金雀异黄素对宫颈癌细胞增殖的影响.pdf

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1、北京大学学报(医学版)JOURNALOFPEKINGUNIVERSITY(HEALTHSCIENCES)·55l··短篇论著·金雀异黄素对宫颈癌细胞增殖的影响韩小龙，王培玉，李子一，谭圣杰，马德福(1．北京大学公共卫生学院社会医学与健康教育系，北京100191；2．中国航天员科研训练中心航天营养与食品重点实验室，北京100094)[关键词】染料木黄酮；宫颈肿瘤；受体，雌激素；细胞增殖[中图分类号]R737．33[文献标志码]A[文章编号]1671—167X(2015)03-0551-04doi：10．3969／j．issn．1671-167X．2015．

2、03．033宫颈癌在女性生殖器官癌瘤中占首位，约占女剂购自美国Bio．rad公司；四甲基偶氮唑盐[3一(4，5．性生殖器官恶性肿瘤的50％以上，在女性各种恶性dimethyhhiazol一2一y1)-2，5-diphenyhetrazoliumbromide，肿瘤中占第二位，仅次于乳腺癌⋯。近年来，由于M1TI1]试剂和ER13激动剂(diarylpropionitrile，DPN)子宫颈炎等子宫颈相关疾病发病率的上升，宫颈癌购于美国Sigma公司；紫外分光光度仪(ND一1000)死亡率在我国妇女中呈逐渐上升趋势，年轻妇女宫购于美国NanoDropTec

3、hnologies公司；酶联免疫检颈癌的发病率也呈上升趋势，寻找有效的预防和测仪购于美国Thermo公司。治疗宫颈癌的方法成为目前研究的重点。1．2细胞培养大豆异黄酮(isoflavone，SI)结构与雌激素相似，人宫颈癌细胞C33A、CaSki、HeLa购自北京协表现出弱的雌激素活性(大约是雌二醇的1／100～和医学院基础医学细胞中心，用含10％(体积分数)1／1000)及抗雌激素活性。目前国内外开发了大胎牛血清的1640培养基，在5％CO(体积分数)、量的大豆异黄酮产品，用于改善妇女更年期症状，预37℃培养箱中培养。防骨质疏松和心血管疾病J。此外，研

4、究已经证实1．3逆转录聚合酶链式反应(reversetranscription了大豆异黄酮的雌激素样作用对预防和治疗激素依polymerasechainreaction，RT-PCR)及引物赖性肿瘤(如乳腺癌、前列腺癌)的发生有效，但大按照Trizol说明书提取总RNA，ERct，ER13和豆异黄酮对非雌激素依赖性肿瘤宫颈癌的影响还不GAPDH的特异性引物序列如下：GAPDH，上游引清楚，因此，本研究将通过细胞试验观察大豆异黄酮物：5．GATGACATCAAGAAGGTGGTGA一3，下游弓I中活性最高的金雀异黄素对宫颈癌细胞增殖的影物5．TFCGTYG

5、TCATACCAGGAAATG一3；ERa，上游响，并探讨其相关的分子作用机制。引物：5．AGAGAAAGATTGGCCAGTACCA．3，下游弓I物：5-TCCTCTTCGGTCT1'IYI’CGTATC-3；ER13，上1资料与方法游引物：5一GTCTGGTCGTGTGAAGGATGTA一3，下1．1材料和试剂游弓I物：5．ACCATTcccACTTCGTAACACT-3。金雀异黄素购于美国LCLaboratories公司；雌1．4蛋白免疫印迹激素受体(estrogenreceptor，ER)仪(SC-542)、ER13按照全蛋白提取试剂盒说明书提取

6、全蛋白，用(SC一8974)和13一actin(SC47778)抗体购自美国二喹啉甲酸(bicinchoninincacid，BCA)蛋白浓度测SantaCruzBiotecnology公司；二抗抗体购自爱尔兰定法进行定量。将50g总蛋白等量上样，用lO％Rockland公司；RNA提取用Trizol试剂、cDNA合成(质量分数)的聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶分离蛋白，试剂盒、胎牛血清、细胞培养基购于美国lnvitrogen湿法转至聚偏氟乙烯膜。用5％(质量分数)脱脂奶公司。PCR试剂盒购于美国AppliedBiosystems公粉溶液室温封闭2h后，anti

7、—ERa，anti—ER13，和B—司；蛋白提取、定量及蛋白免疫印迹相关实验材料试actin抗体用5％脱脂奶粉溶液1：200稀释，4℃孵基金项目：北京市自然科学基金(7122103)和国家自然科学基金资助(81202193)SupportedbytheBeijingNaturalScienceFoundation(7122103)andtheNationalNaturalScienceFoundationofChina(81202193)△Correspondingauthor’Se—mail．madefu@bjmu．edu．en网络出版时间：2015-

8、5—1513：29：36网络出版地址：http：／／www．cnki．net／k