多药耐药基因及缺氧诱导因子

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1、多药耐药基因及缺氧诱导因子：张广健高蕊付军科金鑫张明鑫王健生【摘要】目的分析食管癌多药耐药基因(MDR1)及缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达的相关性及探讨其与临床病理间的关系。方法应用实时定量PCR(QRT-PCR)及DR1及HIF-1α表达水平进行检测。结果34例食管癌组织的MDR1表达显著低于癌旁组织(P<0.05)，但高于正常组织(P<0.05)。而HIF-1α在癌组织的表达水平则显著高于癌旁组织(P<0.05)。两基因表达水平存在正相关关系(P<0.01)。HIF-1α、MDR1表达均与食管癌的分化程度呈正相关。结论MDR1、HIF-1α的

2、表达在食管癌及癌旁组织中均明显上调。HIF-1α可能通过诱导MDR1表达导致食管癌化疗耐药。【关键词】多药耐药基因;缺氧诱导因子;食管癌　ABSTRACT:ObjectiveToexploretheexpressionsofmultidrugresistancegene(MDR1)andhypoxia-induciblefactor1α(HIF-1α)inhumanesophagealcancerandthecorrelationbetasplesfrom34esophagealcancerpatientsRNAandproteinlevelsofMDR1andHIF-1αea

3、suredbyquantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction(QRT-PCR)andDR1expressionlevelofcanceroustissuesasite(P<0.05).Houchhigherthanthatintheparatumortissues(P<0.05).Thereasitesimultaneously.ThemodulationofMDR1expressionisprobablydependentupontheexpressionofHIF-1α.　　KEYDR1);hypo

4、xia-induciblefactor1α(HIF-1α);esophagealcancer　　食管癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，预后较差。50%～60%的患者就诊时已有远处转移，中位生存期4～8个月。虽然近年来化疗方案的改善可以使中晚期食管癌的化疗有效率得到提高，但总的5年生存率仍低于20%[1]。化疗耐药(multidrugresistance,MDR)是导致食管癌药物治疗失败的根本原因。因此，研究食管癌MDR机制是提高其化疗效果最关键一步。缺氧是实体肿瘤生长的微环境特征之一。肿瘤内部总处于相对缺血缺氧的微环境。缺氧诱导因子-1(hypoxia-induciblefacto

5、r1,HIF-1)是缺氧环境下被激活的重要转录因子，其受氧调节的亚基HIF-1α对化疗耐药基因MDR1表达的调控作用受到越来越多的关注。但是，两者的相关性至今未在食管癌组织中得到证实。本文即在mRNA及蛋白水平研究MDR1与HIF-1α在34例食管癌组织中的表达变化及相关性，进而探索其在食管癌中的表达与临床病理特性之间的关系。　　1材料与方法　　1.1材料西安交通大学医学院第一附属医院2005年9月至2009年6月手术切除的食管癌组织标本34例。其中男23例，女11例，年龄30～70岁。按UICC1997年标准分期，T1～T2期19例，T3～T4期15例;N020例，N114例

6、;Ⅰ期9例，Ⅱ期8例，Ⅲ期17例。采集方法：术后0.5h内采集同一患者食管癌组织及癌旁组织。作为对照的正常组织取自上述标本中距肿瘤边缘5cm以上的食管上皮。新采标本由DEPC处理后冻存管分装、液氮运送并立即冻存于-80℃冰箱待用。标本性质均经术后病理证实。　　1.2试剂与仪器DEPC购自Amresco公司;Trizol购自Invitrogen公司;RevertAidTMFirstStrandcDNASynthesiskit试剂盒购自Fermentas公司;SYBRPremixExTaqTMⅡ为TaKaRa公司产品。PCR引物由AugctBiotechnology公司合成。HI

7、F-1α、P-gp抗体均购自Abcam公司，β-actin抗体为SantaCruz公司产品。辣根酶标记羊抗小鼠lgG试剂盒购自北京博奥森公司，BCA蛋白定量试剂盒购自珠海健康元;5810R高速冷冻离心机为德国Eppendorf公司产品;CE2301微量核酸蛋白定量仪为Genequest公司产品;iQ5Real-TimePCRcycler购自Bio-Rad公司。　　1.3实验方法①RNA的提取和互补。按照Trizol试剂说明书操作，并测定RNA浓度及A值，A值在1.8～2.0之间，经10g/k