肿瘤多药耐药的基因治疗

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1、肿瘤多药耐药的基因治疗刘忠民王克勇陈勇肿瘤细胞对化疗约物的耐受性是肿瘤治疗的主要障碍。临床上许多肿瘤在经历了最初有效的化疗之后，最终仍难免于复发，其上要原因是肿瘤细胞対化疗产牛咐受性。因此，逆转肿瘤细胞的耐药性，是提窩肿瘤化疗疗效的关键。研究表明，肿瘤细胞mdrl基因编码的p■糖蛋白(p・glycop「otein,P・gp)的过度表达是导致肿瘤细胞多药耐药(multidrugresistance,MDR)的重要原因［门。冃前许多药物可以用來逆转肿瘤细胞的MDR,但不能从根本上解决问题，效果欠佳,而且具彳j一定的毒副作用［2］。与传统的药物治疗相比，基因治疗具有作用特异，敏感，毒副作用低等诸多

2、优点，在MDR逆转中有广阔的发展前景。1MDRI基因的反义寡聚脱氧核糖核酸(AOD)李惠芳等利用"补于MDRI基因5’末端转录起始部位的AOD转染表达MDRI基I大I的KB■&5细胞株后，细胞内P-gp表达水平下降，细胞内柔红霧索浓度提高，被转染细胞对药物的LC50由原來药物敏感株的5.6倍降为3.2倍。以上结果说明AOD逆转了P-gp介导的约物耐受性，但逆转作用不完全。作者分析其原因之一为AOD的降解问题。为此，作者以脂质体Lipofectin作为转基因载体，使AOD的耐药逆转作用冇所提窩，提示脂质体对作为引导AOD靶向治疗的方式之一［3］。针对AOD的降解问题，Cucco等利用硫代磷酸修

3、饰的MDRI基因的AOD进行MDR逆转,发现在体内外均明显提高口血病细胞耐约细胞系对长春新碱(VCR)的敏感性［4］。因修饰后町増加AOD对核酸酶清除作用的耐受性，且易溶于水，能更有效地与靶基因进行杂交，从而增加了其逆转作用［5］。另冇作者则认为对核酸上的氧原了进行硫代化、甲妹化或用脂质体进行包裹等方法在提髙细胞摄入AOD的同时，一方而增加了细胞痔性，同时也降低了核酸反义抑制的效应。将低分了量的聚乙二醇(PEG)连接在AOD的5的末端，结果显示细胞内AOD摄入率明显增加，窩于其它修饰方法，且不影响细胞的生长特性。说明AOD的5'末端连接PEG在反义治疗领域具有广阔应用前景［6］。2MDRI基

4、因的反义RNAAOD的作用是封闭MDRI基因而影响基I大I的转录，反义RNA则是打MDRI基I大I的mRNA形成二聚休而抑制mRNA的翻译。曹江等［7］利用高表达反义MDRI・RNAJR组质粒pRMAS转染耐药细胞K562/DOX后，英P■糖蛋口近乎阴性，细胞内柔红霉素浓度与敏感细胞系K562几乎-致，说明P■糖蛋白介导的药物外排几乎完全被抑制，显示将反义RNA的模板DNA导入细胞内，町产生大量反义RNA抑制MDRI基

5、大I农达。资料还显不•细胞除对阿壽素的耐受性完全被逆转外，对长春新碱和柔红霉素的耐受性仍保留9.0倍和14.1倍以上，说明P■糖蛋门表达转阴后，MDR并不能完全逆转，提示还有

6、其它机制作用于细胞的MDR。3切割MDRImRNA的核酶核fW(Ribozyme)是正常存在于细胞内并调控基因表达的RNA,具有核背酸内切酶活性，能序列地切割靶RNA,抑制慕I大］的表达。土宝成筹设计合成的能切割MDRI・mRNA第196密码了GUC序列的锤头状核酚疋向克隆于逆转录病毒载体pDOR-neo的BamHI位点。经病毒包装细胞BA317包装后感染人肝癌MDR细胞株BEL-7402/DOX细胞，RT-PCR证实转化细胞屮MDRI-mRNA与未转化细胞相比明显减少其至不能扩增出來。P-gp的农达，与非转化细胞的93.4%〜97.5%相比卜•降至8.2%〜14.6%。并对多种化疗药物重新

7、产牛较高的敏感性。以上结果农明农达核酶的逆转录病毒载体转化BEL-7402/DOX细胞后能冇效地抑制MDRI垄因的表达,使己产个耐药的肿瘤细胞的MDR表型发仆•逆转［8］。说明应用核酶是逆转肿瘤细胞MDR仃效、特异性的方法。4针対MDRI基因调节基因的基因治疗4.1细胞因子基因Stein等［9］的研究发现机体免疫系统的一些细胞因子如TNF,IFN和IL-2可降低MDRI基因mRNA和P-gp的表达水平，增加细胞对MDR相关药物阿霉索(ADM)及VCR的敏感性。但细胞因子静脉应用可产生严重的副作用,将细胞因子基因导入肿瘤细胞,在肿瘤局部微环境中产牛和释放细胞因子，可减轻全身应用的副作用。为此，

8、他们又将TNF和IL・2基因转入人结肠癌耐药细胞系HCT15和HCT笛6细胞屮。结果显示TNF和IL-2基因在人HCT15和HCT馅6细胞中的表达可降低MDRI・mRNA和P-gp的表达水平，使细胞内ADM积累增加，细胞对ADM及VCR敏感性升高。说明TNF和IL・2基因的传染和表达可逆转肿瘤细胞的MDR,联介应用基因治疗和化疗对耐肿瘤的治疗具有潜在的价值［10］。4.2抑癌基因和癌基因研究显示肿瘤纽•织屮p