白三烯受体基因mrna在慢性阻塞性肺疾病患者中的不同表达

《白三烯受体基因mrna在慢性阻塞性肺疾病患者中的不同表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、白三烯受体基因mRNA在慢性阻塞性肺疾病患者中的不同表达【摘要】目的：评价慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者的白三烯受体(LTsR)基因的表达；对比LTsR基因mRNA在COPD组和健康对照组之间表达水平的差异；研究COPD缓解期患者与急性发作期患者的LTsR基因mRNA表达水平是否存在差异。方法：通过LT1R和LT2R特异性引物对59份试验者的血液标本，应用逆转录聚合酶链式反应(RT—PCR)技术检测LT1R和LT2R的表达。引入内参βactin，应用电泳凝胶定位分析仪，1D凝胶分析软件，对比并定量分析LT1R和LT2R基因mRNA在CO

2、PD患者和对照健康者之间的表达差异，对所得数据进行统计学分析、处理和评价。结果：所有COPD患者的标本均检测到编码LT1R和LT2R基因的mRNA表达，且与正常组对比差异有显著性（P<0.05），但缓解期组与急性加重期组之间差异无显著性（P>0.05）。结论：LT1R和LT2R基因mRNA在COPD者外周血白细胞中表达水平显著增高；但缓解期组与急性加重期组患者的表达水平之间无明显差别。【关键词】白三烯受体;慢性阻塞性肺疾病；急性发作期；缓解期　　慢性阻塞性肺疾病（COPD）是包括慢性支气管炎和肺气肿的一组疾病，其特点为均具有气流阻塞并缓慢

3、进行性发展，部分有可逆性，可伴有气道的高反应性［1］。白三烯（leukotriences,LTs）是花生四烯酸通过脂氧酶代谢途径形成的，与COPD的气道炎症反应有密切的关系，而白三烯受体(LTsR)在COPD患者上气道中的表达研究较少。考虑到LTs在人上气道炎症中作为介质的重要作用［2］，本文旨在探讨COPD患者外周血中的LTsR的表达情况。　　1对象和方法　　1.1研究对象分为三组，正常对照组、COPD缓解期组、COPD急性加重期组。　　1.1.1正常对照组健康志愿者20例，年龄50岁～72岁；男性12例，女性8例。　　1.1.2COPD缓解期组COP

4、D缓解期患者22例，男性13例，女性9例；年龄51岁～77岁；均为COPD缓解期，达3个月以上。　　1.1.3COPD急性加重期组COPD急性加重期患者17例，来自于我院2006年9月以来住院患者，年龄48岁～75岁；男性10例，女性7例。所有COPD患者均符合中华医学会呼吸病学分会《慢性阻塞性肺疾病诊治指南》的诊断标准，病程在5a～20a之间。所有参与试验者均排除以下情况：严重肝、肾功能不全，严重心、脑、血管及血液系统疾病，免疫系统疾病及肿瘤，6周内使用过抗生素，有哮喘及变态反应性鼻炎或其他变态反应性疾病史，1年内接受过皮质类固醇或LT调节剂治疗。所有参与

5、者均签订知情同意书。　　1.2研究方法　　1.2．1外周血淋巴细胞提取所有参与者于清晨（空腹8h以上）取外周静脉血5ml，抗凝管4℃保存，并于20min内进行下一步处理。将上述血液转移至20ml离心管中，2000r/min,离心15min，弃上层血浆，留下层血细胞。加入同等体积的RPMI1640混匀，轻轻加入含5ml人淋巴细胞分离液于离心管中，使血液与淋巴细胞分离液清晰分层；2400r/min,离心15min，可见分层；吸取中间层的PBMC，置于离心管中，加入等体积RPMI1640，2000r/min,离心15min；弃去上清，加入3mlRPMI1640，轻

6、轻吹打沉淀；2000r/min,离心15min，吸去上清；沉淀即为淋巴细胞。　　1.2．2用TRIzol法一步分离细胞总RNA淋巴细胞用TRIzol(Invitrogen)试剂按照公司操作指南抽提总RNA，分离的总RNA通过分光光度计(modelDU530;Beckman)进行定量测定。　　1.2．3逆转录聚合酶链式反应(RT—PCR)获得目的基因总RNA根据指导手册以随机引物和逆转录酶(SuperscriptIIReverseTranscriptase;Invitrogen)逆转录成cDNA。测定LT1R、LT2R和βactin的PCR引物［3］

7、。LT1R的引物：上游引物5'TTATGTTCACAAAGGCATTTGG3'；下游引物5'GCTCATGGCTGTCATAAAGAA3';LT2R的引物：上游引物5'ACTATATTGCCTTGGTGGTGGG3'；下游引物5'ATGATGGTGGTCAGTGCCTTC3'；βactin的引物：上游引物5'GACTACCTCATGAAGATCCTCACC3'；下游引物5'TCTCCTTAATGTCACGCACGATT3'。每个反应体系为25μl，包含2.5μl缓冲液(10)，6mmol/LMgCl2，0.2μmol/L三磷酸去氧

8、核苷，0.6μmol/L引物，0.25μlTaqDN