资源描述：
《红曲霉中药合生元制剂中酶活力大小的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、红曲霉－中药合生元制剂中酶活力大小地研究摘要试验选取培养15、21和20d地成熟红曲霉－中药合生元制剂干粉和培养20d地成熟红曲霉－中药合生元制剂湿粉作为样品,每组做3个重复,取平均值.利用紫外分光光度法分别测定不同培养时间下红曲霉粉中地淀粉酶活力、蛋白酶活力和纤维素酶活力.研究结果表明:淀粉酶活力相对较高,且略有随培养天数增加而升高地趋势,蛋白酶活力很低,纤维素酶活力较低.关键词红曲霉－中药合生元制剂淀粉酶活力蛋白酶活力纤维素酶活力1材料与方法1.1仪器DK－8D型电热恒温水槽,上海精宏试验设备有限公司;UV759CRT紫外可见光分光光度计,上海佑科仪器仪表有限公
2、司.1.2化学试剂可溶性淀粉溶液、pH为6.0地磷酸钾盐缓冲液、pH为5.0地磷酸钠盐缓冲液、稀碘液、酪蛋白溶液、0.4mol/L三氯乙酸、0.4mol/LNa2CO3、福林试剂、1%羧甲基纤维素钠、3,5－二硝基水杨酸、葡萄糖溶液和酪氨酸溶液.1.3试验方法样品选择:A组为培养15d地红曲霉－中药合生元制剂干粉,B组为培养21d地红曲霉－中药合生元制剂干粉,C组为培养20d地红曲霉－中药合生元制剂干粉,D组为培养20d地红曲霉－中药合生元制剂湿粉,经测定D组样品含水量为29.5%.1.3.1红曲霉－中药合生元地制作先将山楂、红枣和山药等按照一定比例与大米混合蒸熟备
3、用,将250mL三角烧瓶放入高压灭菌锅内,高压灭菌30min,取出,将蒸熟地大米平铺于三角烧瓶底部,约4～5cm,封口,高压灭菌30min,同时用灭菌好地无菌水配制0.2%冰乙酸待用,待培养基冷却后,用接种环挑取耐中药地红曲霉菌株10～12次稀释于30mL0.2%地冰乙酸溶液中,每个三角烧瓶中接种1～1.5mL,接种量随培养基厚度自行调整.放入培养箱中,32℃培养14～17d,培养好后,用玻璃棒转移至托盘中,40℃鼓风烘干24h即可,然后粉碎制成粉末备用.1.3.2粗酶液地制备发酵成熟地红曲霉－中药合生元制剂,经40℃恒温烘干后,准确称取1.000g样品,以5mL缓
4、冲溶液溶解,加95mL40℃温水,40℃浸提6h,以脱脂棉过滤备用.1.3.3淀粉酶活力测定在20mL试管中,加入5.0mL0.5%可溶性淀粉及1.0mL磷酸缓冲液,于40℃恒温水浴中预热5min,然后加入1.0mL待测酶液,摇匀,准确反应1h,取出,吸取70.0μL该反应液于3.0mL稀碘液中,用分光光度计在660nm波长下测定其光密度(OD)值,测定酶活力.酶活力定义:1g固体酶粉,于40℃及pH为6.0条件下1h液化1g可溶性淀粉,即为1个淀粉酶活力单位,以U/g表示.饲料添加剂26饲料研究FEEDRESEARCHNO．01,2013淀粉标准曲线绘制:分别配制
5、质量浓度为0.1%、0.2%、0.3%、0.4%和0.5%地可溶性淀粉溶液,各取5.0mL,加1.0mL磷酸缓冲液,于40℃恒温水浴中预热5min,然后加入1.0mL去离子水,摇匀,准确反应1h,取出,吸取70.0μL该反应液于3.0mL稀碘液中,用分光光度计660nm波长下测定其OD值,绘制标准曲线.1.3.4蛋白酶活力测定在20mL试管中,加入1.0mL待测酶液,置于40℃水浴中预热2min,再加入1.0mL预热地2%酪蛋白,精确保温10min,立即加入2.0mL0.4mol/L三氯乙酸,保温20min,3000r/min离心2min,吸取1.0mL上清液,加5
6、.0mL0.4mol/LNa2CO3和1.0mL福林试剂,40℃水浴保温发色20min,于660nm下测定其OD值,测定酶活力.酶活力定义:在40℃,每分钟水解酪蛋白产生1μg酪氨酸,定义为1个蛋白酶活力,以U/g表示.酪氨酸标准曲线绘制:分别配制质量浓度为20、40、60、80和100μg/mL地酪氨酸溶液,各取1.0mL,加5.0mL0.4mol/LNa2CO3和1.0mL福林试剂,40℃水浴保温发色20min,于660nm下测定其OD值,绘制标准曲线.1.3.5纤维素酶活力测定取20mL试管,加2.0mL1%羧甲基纤维素钠,于50℃水浴中预热2～3min,加0
7、.5mL待测酶液,加入1mLpH5.0地磷酸钠盐缓冲液,保温30min,取出加入2.5mL3,5－二硝基水杨酸,沸水浴煮沸5min,冷却后,分光光度计530nm处测定其OD值,测定酶活力.酶活力定义:在50℃及pH为5.0条件下,30min水解羧甲基纤维素钠生成1μg葡萄糖地酶量,为1个纤维素酶活力单位,以U/g表示.葡萄糖标准曲线绘制:分别配制质量浓度为40、60、80、100、150、160、200、210和300μg/mL地葡萄糖溶液,加入2mL去离子水和1mLpH5.0地磷酸钠盐缓冲液,保温30min,取出后加入2.5mL3,5－二硝基水杨酸,沸水浴煮沸
