大鼠甲状旁腺细胞体外培养及功能的实验研究.doc

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1、大鼠甲状旁腺细胞体外培养及功能的实验研宄作者：董建敏夏永兴杨春雷【摘要】目的：探讨大鼠甲状旁腺细胞的培养方法及其分泌功能，为甲状旁腺细胞移植奠定实验基础。方法：胶原酶和胰蛋白酶系列消化甲状旁腺后，进行细胞培养。透射电镜检查培养5d的甲状旁腺细胞，对1、3、5、7d的细胞培养液行甲状旁腺激素测定。结果：培养5d的甲状旁腺细胞具有丰富的粗面内质网、高尔基复合体、杆状的线粒体和分泌颗粒。甲状旁腺细胞经过培养后可以正常分泌甲状旁腺激素，以第5天为最佳。结论：培养5d的甲状旁腺细胞仍保持原有的形态结构，分泌功能最强，可作为同种移植的最佳供体。【关键词】甲状旁腺•细胞培养•甲状旁腺激素[ABST

2、RACT]Objective：ToinvestigatetheculturetechniqueandsecrethyroidcelIsinratsixperimentalbasisofnsplantation.Methodglandsweredigesterypsin,isolatedparultured.Thecellscuoryfunctionofparatnordertoestablisheparathyroidcelltrads：Afterparathyroidbycollagenaseandtathyroidcellswereclturedfor5dayswereobser

3、vedbytransmissionelectronmicroscopy.donorHLAclassIantigens[J].Science,1991,252(5013)：1700—1702.tively.Results：Parathyroidcellsculturedfor5dayshadabundantroughsurfacedendoplasmicreticula、Golgibodies、stabmitochondriaandsecretorygranules.Culturedpadsecreteparathyroispeciallyonthe5thdathyroidcellsc

4、ultussessoriginalmorphhavemaximumsecretirathyroidee1lscouldhormonenormally,eay.Conclusion：Parredfor5daysstillpoologicstructureandngfunction,soitisanoptimaldonorfortransplantation.【KEYWORDS】Parathyroidgland•CellcultureParathyroidhormoneParathyroidhormoneobtainedfromthecellculturefluidonday1，3，5a

5、nd7wasmeasuredrespec甲状旁腺功能低下症是甲状腺术后的严重并发症，极大地影响患者术后的生活质量。目前多采用维生素D和钙剂治疗，尚无有效的激素替代疗法［1］。为了迗到钙、磷的生理调节，避免钙剂治疗所产生的副作用，甲状旁腺移植已渐成为治疗甲旁低的主要手段［2］。本研究对PTG细胞的体外培养方法进行探讨，为PTG细胞移植奠定实验基础。1材料与方法实验材料2〜3周龄Wistar大鼠18只，雄性，体质量25~50g，由哈尔滨医科大学第一临床医学院实验动物中心提供。主要试剂和仪器包括胶原酶V、胰蛋白酶、RPMI1640培养液（Gibco公司）、甲状旁腺激素（parathyroi

6、dhormone,PTH）N-tactPTHIRMA26100放免试剂盒（美国DiaSorin公司）、JEM-1220透射电镜和C02培养箱。实验方法PTG切取与细胞培养Wistar大鼠腹腔注射麻醉，无菌手术切取双侧PTG，经病理组织学检查证实。将组织置入4°CRPMI1640培养液中漂洗，吸除培养液，剪成lmmXlmmXlmm大小的碎块。加入％的胶原酶在37°C恒温水浴中振荡消化lOmin,然后用Hank’s液洗2遍，再以％的胰蛋白酶消化5min,RPMI1640培养液终止消化。离心去上清后移入含RPM11640培养液的培养瓶中。细胞浓度为lX105mL-l。台盼蓝染色计数细胞活力

7、，培养瓶置于37°C内充95%空气，5%C02的培养箱中恒温培养。倒置显微镜下观察不同时段的细胞形态。PTH测定无菌技术收集1、3、5、7d的PTG细胞培养液各9瓶，-80°C冻存备用，统一检测FTH。透射电镜观察采用无菌技术在培养5d的PTG细胞培养瓶内加入mL%的胰蛋白酶液，静置3min，其间置于倒置相差显微镜下观察。待细胞质回缩、细胞间隙增大后，立即加入含有胎牛血清的培养液终止消化。用吸管吸取培养液，轻轻反复吹打瓶壁细胞，然后将细胞悬液移入离心管，离