体外培养树突状细胞的实验研究论文

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1、摘要论文题目：体外外周血培养树突状细胞的实验研究专业：肿瘤学研究生：郭辉指导教师：赵勇刚教授摘要目的提取神经胶质瘤患者外周血分离出单核细胞，进行体外培养、诱导产生树突状细胞，并探讨细胞因子对树突状细胞诱导、分化成熟的影响，为最终临床应用树突状细胞免疫治疗神经胶质瘤打下基础。方法临床收集确诊为神经胶质瘤的患者静脉血共20份，每份20ml，经淋巴细胞分离液梯度分离出单个核细胞（PBMC），贴壁法获得单核细胞后，每个样本均分为两份，共两组，分别加入GM-CSF+IL-4和GM-CSF+IL-4+Flt3-L进行诱导，在相同条件下进行体外培

2、养，隔日半量换液，补充细胞因子，共7天，用倒置显微镜观察其形态，并进行流式细胞仪检测其表面标志，对培养结果在获得率、纯度和细胞表型三方面进行对比。结果应用GM-CSF+IL-4和GM-CSF+IL-4+Flt3-L两种培养方法均可诱导产生树突状细胞,而且在树突状细胞的获得率和纯度方面无统计学差异，经流式细胞仪检测，应用GM-CSF+IL-4组所获得的树突状细胞符合不成熟树突状细胞的表型，而GM-CSF+IL-4+Flt3-L组所诱导的树突状细胞表达更高比例的成熟标志CD83，趋向于成熟的树突状细胞表型。结论从胶质瘤患者外周血中分离出

3、的单核细胞，经GM-CSF和IL-4刺激后，可以诱导、扩增出大量的树突状细胞，该细胞具有典型的树突状细胞的形态；由GM-CSF和IL-4诱导产生不成熟的树突状细胞，存在Flt3-L时可诱导生成成熟的树突状细胞。关键词：树突状细胞；Fms样酪氨酸激酶3配体（Flt3-L）；体外培养；外周血；胶质瘤论文类型：应用基础研究I摘要Subject:TheStudyofInductionOfDendriticCellsFromHumanPeripheralBloodMonocytesInVitroSpecialty:OncologyName:G

4、UOhuiSupervisor:ProfessorZHAOyong-gangABSTRACTObjectiveWeseparatethemonocytes(MNC)fromtheperipheralbloodofpatientswithmalignantglioma.Thenthemonocytes(MNC)areaddeddifferentcombinedcytokinestoinducethegenerationofdendriticCells(DCs)invitro.Theaimofthestudyistoinvestigat

5、etheeffectofcytokinesonthegenerationofDCs.ItwillprovidetheexperimentalfoundationforclinicalgliomaimmunotherapyofDCs.MethodsWegatheredtheperipheralblood20mlfrom20patientswithmalignantglioma,theperipheralbloodmononuclearcells(PBMC)wereseparatedfromthebloodbycentrifugalin

6、densitygradient.Theperipheralbloodmononuclearcells(PBMC)wereculturedinbottles,thentheadhesioncellscollectedfromtheperipheralbloodmononuclearcells(PBMC)fromeachpatientwhichweredividedintotwoparts,thendividedintotwogroups.OnegroupwasaddedcombinedcytokinesGM-CSF+IL-4,theo

7、therwasaddedcombinedcytokinesGM-CSF+IL-4+Flt3-L.Afterculturedforsevendaysinthesamecondition,collectadherentcells,observetheirmorphologybyinvertedmicroscopeanddetectimmunefactorswithflowcytometry.Wecomparedthetwogroupsintermsofpick-uprate、purityandphenotypeofcells.Resul

8、tsThedendriticCells(DCs)canbeinducedfromthemonocytes(MNC)culturedwithcombinedcytokineseitherGM-CSF+IL-4orGM-CSF+IL-4+