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1、无血清体外培养树突状细胞的研究论文张怀东，宋振岚,李伟平【摘要】本研究的目的是建立对外周血来源的树突状细胞(dendriticcell,DC)的无血清培养方案。以含胎牛血清(FCS)、人AB血清的培养液作为对照。分离健康志愿者外周血单个核细胞（PBMNC），在不同培养液中分别加入GM-CSF（100ng/ml）、IL-4（500U/ml）培养6天，再分别加入钙离子载体A23187（100ng/ml）继续培养24小时，于倒置显微镜下观察细胞形态，流式细胞术分析细胞表型，MTT比色法检测各组DC刺激同种异体外周血T细胞
2、增殖的能力和DC刺激的T细胞对K562细胞的杀伤作用。结果表明：无血清培养组培养出典型形态的DC，其表面CD14分子的表达明显减少.freel-freeMediumAbstractThisstudyedtoinvestigatetheprotocolinvitrotoincubatethedendriticcell(DC)derivedfromperipheralbloodmonocytesusingserum-freemediumX-VIVO20.Peripheralbloodmonocytesfromhealt
3、hydonorslGM-CSFand500U/mlIL-4,respectively.Aftercultivationfor6days,theylcalciumionophoreA23187.Aftercultivationfor24hoursthecellularmorphologyicroscope,thesurfacemarkersetry,theproliferationofallogeicTcellsetry,thespecificcytotoxicityofTcellsprimedinedbyMTTas
4、say.Theresultssho-free,fetalcalfserum(FCS)andhumanABserummediums,cellsdisplayedcharacteristicmorphologicalfeaturesofDC.SimultaneouslyCD14expressionethodscouldevidentlystimulatetheproliferationofallogeicTcell.Asparedcontaininggroups,.freel-freegroupsshoostthesa
5、meallo-stimulatorycapabilityandcellularmorphologyandsurfacemarkers,andTlymphocytesprimedilarkillingactivitytoK562(P0.05).ItisconcludedthatthereisnosignificanceinDCnumbers,morphology,epitopeandabilitytostimulatetheproliferationofallogeicTcellsbet-freeX-VIVO20me
6、diumandDCinducedbyserum-containedmedium.DCculturedandinducedbyserum-freemediumis-freemedium;calciumionophore;peripheralblood树突状细胞是Steinman和Cohn于1973年首先报道的,因其成熟时有树突样或伪足样突起而得名［1］。它源于造血干细胞,广泛分布于淋巴组织和非淋巴组织中,是机体内功能最强的抗原呈递细胞(antigen-presentingcells,APC)［2］，其最大的特点是能够
7、显著刺激初始型T细胞增殖,是机体免疫反应的始动者。目前，多数体外培养液包含胎牛血清、混合人(AB型)血清或自体血清,由于血清中包含个体差异性的生长因子,异体血清又有外来抗原及危险感染侵入的弊端,人自体血清中又含有某些抑制DC生长的因子，这将使DC的临床应用受到限制。本实验采用无血清培养液X-VIVO20则避免了上述缺点。本实验通过比较X-VIVO20与含FCS、人AB血清的培养基对体外诱导扩增DC的影响，为进一步优化无血清培养液条件，使DC疗法应用于临床提供实验依据。材料和方法材料淋巴细胞分离液（Ficoll，密度
8、1.077）购于上海华精生物高科技有限公司，rhGM-CSF购于华北制药集团金坦生物技术开发有限公司，rhIL-4、人血白蛋白、四甲基偶氮唑盐（MMT）、钙离子载体A23187均为Sigma公司产品，人AB血清（大连市中心血站产品），胎牛血清（民海生物工程有限公司产品），无血清培养液(Cambrex公司X-VIVO20培养液)，FITC标记的鼠抗人CD83、
