大鼠甲状旁腺细胞体外培养及功能的实验研究

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1、大鼠甲状旁腺细胞体外培养及功能的实验研究作者：董建敏　夏永兴　杨春雷【摘要】目的：探讨大鼠甲状旁腺细胞的培养方法及其分泌功能，为甲状旁腺细胞移植奠定实验基础。方法：胶原酶和胰蛋白酶系列消化甲状旁腺后，进行细胞培养。透射电镜检查培养5d的甲状旁腺细胞，对1、3、5、7d的细胞培养液行甲状旁腺激素测定。结果：培养5d的甲状旁腺细胞具有丰富的粗面内质网、高尔基复合体、杆状的线粒体和分泌颗粒。甲状旁腺细胞经过培养后可以正常分泌甲状旁腺激素，以第5天为最佳。结论：培养5d的甲状旁腺细胞仍保持原有的形态结构，分泌功能最

2、强，可作为同种移植的最佳供体。【关键词】甲状旁腺·细胞培养·甲状旁腺激素【ABSTRACT】Objective:Toinvestigatetheculturetechniqueandsecretoryfunctionofparathyroidcellsinratsinordertoestablishexperimentalbasisofparathyroidcelltransplantation.Methods:Afterparathyroidglandsweredigestedbycollagenasea

3、ndtrypsin,isolatedparathyroidcellswerecultured.Thecellsculturedfor5dayswereobservedbytransmissionelectronmicroscopy.donorHLAclassIantigens[J].7Science,1991,252(5013):1700-1702.（收稿日期：2008-01-05）tively.Results:Parathyroidcellsculturedfor5dayshadabundantrough

4、surfacedendoplasmicreticula、Golgibodies、stabmitochondriaandsecretorygranules.Culturedparathyroidcellscouldsecreteparathyroidhormonenormally,especiallyonthe5thday.Conclusion:Parathyroidcellsculturedfor5daysstillpossessoriginalmorphologicstructureandhavemaxi

5、mumsecretingfunction,soitisanoptimaldonorfortransplantation.【KEYWORDS】Parathyroidgland·Cellculture·ParathyroidhormoneParathyroidhormoneobtainedfromthecellculturefluidonday1，3，5and7wasmeasuredrespec　　甲状旁腺功能低下症（简称甲旁低）是甲状腺术后的严重并发症，极大地影响患者术后的生活质量。目前多采用维生素D和钙剂治

6、疗，尚无有效的激素替代疗法［1］。为了达到钙、磷的生理调节，避免钙剂治疗所产生的副作用，甲状旁腺（parathyroidgland，PTG）移植已渐成为治疗甲旁低的主要手段［2］。本研究对PTG细胞的体外培养方法进行探讨，为PTG细胞移植奠定实验基础。71　材料与方法1.1　实验材料　2～3周龄Wistar大鼠18只，雄性，体质量25~50g，由哈尔滨医科大学第一临床医学院实验动物中心提供。主要试剂和仪器包括胶原酶V（Sigma公司）、胰蛋白酶（Sigma公司）、RPMI1640培养液(Gibco公司)、甲

7、状旁腺激素(parathyroidhormone，PTH)N-tactPTHIRMA26100放免试剂盒(美国DiaSorin公司)、JEM-1220透射电镜（日本JEOL公司）和CO2培养箱（德国Heraeus公司）。1.2　实验方法1.2.1　PTG切取与细胞培养　Wistar大鼠腹腔注射麻醉，无菌手术切取双侧PTG，经病理组织学检查证实。将组织置入4℃RPMI1640培养液中漂洗，吸除培养液，剪成1mm×1mm×1mm大小的碎块。加入2.5%的胶原酶在37℃恒温水浴中振荡消化10min，然后用Hank

8、’s液洗2遍，再以0.25%的胰蛋白酶消化5min，RPMI1640（含15%胎牛血清、青霉素100U/mL、链霉素100g/mL）培养液终止消化。离心去上清后移入含RPMI1640培养液的培养瓶中。细胞浓度为1×105mL-1。台盼蓝染色计数细胞活力，培养瓶置于37℃内充95%空气，5%CO2的培养箱中恒温培养。倒置显微镜下观察不同时段的细胞形态。71.2.2　PTH测定　无菌技术收集1、3、5、7d的PTG细