大鼠骨髓基质细胞体外培养及定向诱导分化为成骨细胞的实验研究

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1、广西医科大学硕士学位论文大鼠骨髓基质细胞体外培养及定向诱导分化为成骨细胞的实验研究姓名：白鹤申请学位级别：硕士专业：骨外科指导教师：赵劲民;杨志2003.5.1大鼠骨髓基质纲臆体井培养及定尚诱导分化为成骨细胞的实验研究摘要目的：建寺一种骨髓基质细胞(BMSCs)体外培养，定向诱导分化为成骨细胞的方法，并探讨其体外成骨能力。方法：冲洗法获取SD大鼠骨髓，使用pereoU分离液密度梯度离心分离提纯BMSCs，进行体外培养，保留黏整细藏传筏，在培养滚中添翔逸塞米松(Dex)、维生素C(VitC)、B．甘油磷酸钠(13．GP)，观察细胞生长状态，通过碱性磷酸

2、酶(ALP)染色和VonKossa染色观察其淘成骨缎蕤分绽及体外成骨憾况。结果：BMSCs呈成纤维细胞样生长，增殖能力强，生长迅速。诱导条件下细胞的ALP活性明显增高，并区窭瑗钙健缭节。结论：使用本实验方法，获得的BMSCs增殖能力强，在地塞米松、维生素C和B．甘油磷酸钠联合诱导下可定蠢分纯隽类残骨缨瑰，域骨能力肯定，遥合终必骨缀缓1工程的种子细胞。关键词：骨髓基矗猫施；种子细胞体外培弊。；成骨诱导；成～a《考lksearchincultureofthebonemarrowstromalcells(BMSCs)fromratandinducement

3、themtoosteoblastsinvitroAbstractobjectiveToestablishamethodtoculturethebonemarrowstromalcells(BMSCs)fromratsandinducethemtoosteoblastsinvotro，andtoexploreitsosteogeneticability．MethodsThebonemarrowwasaspiratedfromtheboneoflimbsofratsandWasisolatedbygradientcentrifugationinpe’rc

4、oll．111emononuclearcellswerecollectedandculturedinvitro，andtheadherentcellswerekept．ThehigherpurityofBMSCswereobtainedbyrepeatedlyremovalofnonadherentcells．DuringthepaSsage，BMSCswereculturedinthedefinedmediumcontainingthedexamethasone，VitCandNatrium一13-glycerophosphattoldthegro

5、wthandproliferationwereobserved．ThedifferentiationtoosoblastsandEosteogeneticconditionsinvitrowereobservedbythestartingofALPandVonKossa．ResultsBMSCsgrewrapidlyandproliferatedinvisiblesymmetriccolonieswithfibroblastappearance．TheALPactivityofpas,,；agecellsincreaseddramaticallyan

6、dthecalcificationnodulesoccuredundertheindecement．ConclusionBMSCswereobtainedandshowedthestrongabilityofpm[iferationbyusingthismethod，andinthedefmemeditmtwe[einducedanddifferentiatedtofibroblastswithDex，VitCandB-pG．SoBMSCsCanbeservedastheseedingcellsinbonetissueengineering．Keyw

7、ordBoneMarrowStromalCells(BMSCs)；CulturedInVitro；OsteogenicInduction：OsteogenicDifferentiation；SeedingCells6前言由于各种原因造成的骨缺损、骨不连是临床上非常常见的疾病，其修复一直是医学界的棘手问题。近年来，骨组织工程学的提出和发展为骨缺损的临床修复开拓了一个全新的研究及应用领域。而选择适宜的种子细胞是骨组织工程研究中基本而又重要的问题。骨组织工程研究对于种子细胞的要求主要为‘1】：(1)来源广泛、取材简便、创伤小。(2)具自‘明确形成骨组织的能

8、力。(3)能够经过多次传代达到所要求的细胞数量，同时保持其成骨表型。目前种子细胞的来源有骨、骨膜、骨髓及骨外