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1、成人骨髓基质干细胞体外培养及定向诱导分化为成骨细胞作者：滕勇，胡蕴玉，安书杰，戴先文，赵黎，白建萍，李旭升，吕荣【关键词】干细胞[Abstract]AIM:Tobuildamethodtoculturebonemarrowderivedmesenchymalstemcells(MSCs)invitroandtoinvestigatethefeasibilityofinducingMSCsintoosteoblasts・METHODS:HumanMSCswereisolatedfromadultbonema
2、rrowandpurifiedbypercolldensitygradientcentrifugationandculturedinvitro.TheMSCsattachmentformedafter7~10dandtheMSCsofthepassage3werechosentoinduceintoosteoblasts.Fifteendayslater,thealkalinephosphataseassaywasconductedusingmodifiedcalciumcobaltstainingmet
3、hod,typeIcollagenandosteocalcinassaywasconductedusingimmunohistochemistryandcalciumnodeassaywasdoneusingalizarinredstaining.RESULTS:HomogeneousMSCswereobtainedbypercol1densitygradientcentrifugation.TheinducedMSCshadtypicalappearanceofosteoblasts.Therateof
4、ALPexpressionwas81%,theexpressionsofcollagentypeIandosteocalcinwerepositive,andcalciumnodeswereseen.CONCLUSION:TheMSCscanbeseparatedfromadultbonemarrowandculturedinvitro,whichcanbeinducedintoosteoblasts.[Keywords]bonemarrow;stemcells;adult;tissueengineeri
5、ng;osteogenesis/drugeffects【摘要】目的：建立成人骨髓基质干细胞(MSCs)体外培养的方法，并探讨定向诱导分化为成骨细胞的途径.方法：抽取成人骨髓，Percoll密度梯度离心法进行体外培养，贴壁细胞传代，取第3代细胞在培养基中添加成骨诱导剂地塞米松、B甘油磷酸、维生素C,培养15d后，在倒置显微镜观察细胞形态，钙一钻法染色检测碱性磷酸酶(ALP)表达，免疫组化(SABC法)检测I型胶原、骨钙素表达，茜素红染色检测钙结节形成.结果：Percoll密度梯度离心法培养可获得均一的MSC
6、s；诱导分化的MSCs呈典型的成骨细胞形态；ALP染色阳性率可达81%以上；I型胶原、骨钙素表达阳性；茜素红染色见钙结节形成.结论：可以从成人骨髓中培养出MSCs,并可定向诱导分化为成骨细胞，可用作临床骨组织工程种子细胞.【关键词】骨髓，干细胞；成年人；组织工程；骨生成/药物作用0引言种子细胞、支架材料、生长因子是组织工程的三大要素，寻找合适的种子细胞是成功的重耍因素[1]・目前骨组织工程种子细胞主要有骨、骨膜、骨髓和其他非骨组织.骨髓基质T•细胞(marrowmesenchymalstemcells,M
7、SCs)因其來源充足，取材方便安全，便于培养和基因修饰，增生活跃、多向分化及成骨能力确切[2-4],从而受到广泛关注，具有广泛的应用前景.自从Maniatopoulos等[5]1988年首次报道鼠MSCs经体外培养可形成钙化的骨样组织以来，从动物骨髓诱导分化成骨细胞已不困难，人们目前已能从胎儿骨髓屮分离出MSCs.成人骨髓屮MSCs含量较少,能否分离、分离的方法如何是目前研究的方向.本研究在动物实验基础上建立临床成人MSCs的培养和诱导成骨的方法，为组织工程走向临床作准备.1材料和方法1.1材料骨髓取自5
8、例骨科取骼骨患者,年龄分别为28,30,35,55,60岁.2例诊断脊柱滑脱；3例诊断四肢骨不连接.5例均无代谢性骨病及结核，肝肾功能正常.经知情同意，术中取骼骨前从骼后上棘抽取骨髓5mL,吸入加有0.5mL肝素的20mL无菌注射器.主要试剂：IDMEM低糖培养基、胰酶均为Gibco产詁，胎牛血清为Hyclone产品，地塞米松、B甘油磷酸、维生素C均为Sigma产品，Percol1分离液Pharmacia产品.兔抗人【型胶原多
