慢性庆大霉素损伤后豚鼠前庭感觉上皮蛋白激酶c表达和活性

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1、慢性庆大霉素损伤后豚鼠前庭感觉上皮蛋白激酶C表达和活性　　摘要:目的研究庆大霉素慢性损伤后豚鼠前庭终器蛋白激酶C（PKC）活性的变化及其βⅠ，βⅡ，γ亚型的表达，探讨PKC与前庭损伤修复的关系.方法采用免疫细胞化学法观察椭圆囊斑、球囊斑和壶腹嵴PKCβⅠ，Ⅱ，γ亚型的表达;应用γ-32P示踪检测前庭终器PKC活性的变化.结果PKCβⅠ，Ⅱ，γ亚型在前庭感觉上皮细胞均呈阳性表达，上皮下结缔组织呈阴性表达.βⅡ，γ亚型较β1亚型表达稍弱，不同亚型抗原分布不完全相同.与对照组相比，PKCβⅠ，γ在停止注射庆大霉素后1d其表达明显减弱，随后其表达逐渐增加，至1icins;vestibule;epith

2、elium;proteinki-naseC;guineapigs　　Abstract:AIMToinvestigatethePKCexpressionandac-tivityafterchronicgentamicintoxicityinvestibularterminal　organsofguineapigsandtostudytherelationsbetmunohistochemicalmethod，theexpressionsofPKCβⅠandPKCγinedingineapigmaculautriculus，maculasacculusandcristaampullaris.The

3、γ-32PeasuretheactivityofPKCinvestibularterminalorgans.RESULTSThepositiveexpressionofPKCisoformsβⅠ，Ⅱandγ.There.ThestainofPKCisoformsβⅡandγsicinandthenitincreasedgradually.Theexpressionongdifferentgroups.ThechangetrendofPKCactivityi-lartotheexpressionchangeofPKCβⅠandγasaechangesofPKCexpres-sionandacti

4、vityinvestibularterminalorgansofguineapigsafterchronicgentamicintoxicityandtheantigendistributionsofdifferentPKCisoformsayplayasignificantroleininjuryrepairprocessofvestibulesensoryepitheliumanddifferentPKCisoformsmayhavedifferentphysiologicalfunctionsrespectively.　　0引言　　前庭毛细胞的损伤是引起前庭系统疾病的主要原因之一.如何促

5、进前庭毛细胞损伤的修复，已成为治疗前庭疾病的关键所在.近年来的研究已经证实前庭毛细胞在受到损伤时会出现凋亡现象，并且毛细胞损伤以后可以部分再生，从而促进前庭结构和功能的恢复［1-4］.但是在毛细胞凋亡、增殖和分化过程中，会受到多种因素的影响，这些因素又必须通过复杂的细胞内信号转导通路，将信息传至核，激活或抑制下游基因组的表达才能发挥作用.我们采用免疫细胞化学法观察椭圆囊斑、球囊斑和壶腹嵴PKCβⅠ，Ⅱ，γ亚型的表达，并应用γ-32P标记底物检测前庭终器PKC活性的变化，目的在于从胞内信号转导水平探索前庭感觉上皮的损伤修复机制.　　1材料和方法　　1.1材料青年健康花色豚鼠44只，雌雄不拘，耳廓

6、反应灵敏，体质量350～450g，由本校实验动物中心提供.PKCβⅠ，Ⅱ，γ亚型多克隆抗体购于SantGruz公司，SABC试剂盒购于博士德公司，PKC活性检测试剂盒购于Gibco公司，γ-32PATP由北京市亚辉生物医学工程公司提供，硫酸庆大霉素注射液由本校西京医院制剂中心生产.　　1.2方法　　1.2.1实验分组及前庭损伤动物模型的建立24只豚鼠随机分为对照组和实验组，每组4只，用于灌注切片;另取20只豚鼠行PKC活性检测，每组4只.对照组动物每日ip生理盐水1mL，实验组每日ip庆大霉素150mg・kg-1，连续15d.分别于停药后1，3，7，14和21d处死实验组和对照组

7、动物，其中PKC活性检测不设14d组.　　1.2.2切片的制备采用20g・L-1的戊巴比妥钠30mg・kg-1ip麻醉，40g・L-1多聚甲醛灌注，取出双侧听泡，解剖显微镜下行蜗管内灌注固定，40g・L-1多聚甲醛中继续固定24h，100g・L-1ED-TANa2溶液中脱钙10d，250g・L-1蔗糖溶液中脱水3d