豚鼠一侧前庭损毁后前庭内侧核gfap表达

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1、豚鼠一侧前庭损毁后前庭内侧核GFAP表达　　关键词:迷路/外科学;前庭神经核;前庭;豚鼠;神经胶质原纤维酸性蛋白　　摘要:目的观察左侧迷路切除后前庭内侧核（MVN）胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达变化.方法左侧迷路切除后，不同存活时间行前庭内侧核GFAP二步法免疫组化染色.结果一侧迷路切除（UL）后可诱导双侧MVN区星形胶质细胞GFAP免疫反应增强，且术侧大于未损侧，GFAP反应在术后10h已较正常对照增强，20h强于10h，此后40h至20dGFAP反应处于下降趋势.结论UL后可诱导MVN区胶质细胞GFAP免疫反应增强.初级前庭传入或中枢前庭神经元的静息放电降低可能与胶质细胞反应有关，但其

2、在前庭代偿中的作用尚有待研究.　　Keyedialvestibularnucleus（MVN）folloy（UL）.METHODSAftersectingleftlabyrinthectomy，theimmunohistologicalstainingofGFAP　ed.RESULTSGFAPstainingenhancementy.Hoeevident10hpost-ULandmunostainingintheMVN.Thefallintherestingdischargeoftheprimaryvestibularaf-ferentsand/orinthedeafferentedcentr

3、alvestibularneuronsmaycausetheastrocyticreaction.Butthesignificanceofthereactivesatrocytesinthevestibularpensationisstillun-knoedialvestibularnucleus，MVN）区GFAP在一侧前庭损毁后表达的改变，并探讨其在前庭代偿过程中可能的作用.　　1材料和方法　　1.1材料健康成年杂色豚鼠24只，体质量350～500g，雌雄不拘，随机分组:对照组（n=4）、术后10h组（n=4）、术后20h组（n=4）、术后40h组（n=4）、术后6d组（n=4）及术后20

4、d组（n=4）.1.2方法①豚鼠以速眠新（846合剂）注射液（0.8mLkg-1）麻醉.取耳后下切口，暴露听泡并打开.以显微剥离子及吸引器打开前庭并破坏、吸除耳石器及壶腹嵴等，将浸有无水乙醇的明胶海绵涂布复达欣粉后置入前庭，缝合切口，造模完成，动物置于亮处恢复.动物养至预定时间以过量戊巴比妥纳麻醉，自左心室向主动脉插管，快速注入生理盐水200mL冲洗，以40gL-1多聚甲醛600mL灌注固定.断头并剥除颅骨，取下脑干前庭核区及对应小脑区40gL-1多聚甲醛液中后固定，石腊包埋，切片厚4μm行GFAP免疫组化反应.②二步法免疫组化染色:为石蜡切片常规脱蜡至水化，微波抗原修复，30mLL-1H2O

5、2灭活内源性过氧化物酶，胰酶消化10min，50mLL-1正常山羊血清封闭10min，倾去血清，加兔抗GFAP（博士得公司），4℃湿盒过夜，37℃复温1h，加入酶标二抗（DAKO，美国）恒温30min，DAB显色，苏木素复染，脱水、透明、封片.免疫组化对照实验采用同等稀释度的正常家兔血清及血清稀释液替代GFAP抗体.③对照实验:包括以PBS或正常羊血清代替一抗.两种均未观察到特异性染色.④结果判定:阳性细胞记数标准为免疫染色阳性胞体，或无胞体但阳性胶质细胞突起向一中心点辐辏.各组动物取相同切面的切片3张，每组动物共记数12（4×3）张切片.每张切片在200倍率下选一个阳性细胞最多的视野记数.　

6、　统计学处理:采用SAS软件行t检验.　　2结果　　2.1手术组动物的行为学特征所有列入实验组的动物术后均出现明确的单侧前庭外周损毁的行为学特征.这些特征包括:自发性眼震，倾倒、头位偏斜及绕圈行为等，不典型者剔除.　　2.2对照组MVN区GFAP的免疫反应性对照组豚鼠MVN区观察到GFAP阳性星形胶质细胞，主要为原浆型星形胶质细胞（又称苔藓细胞）.突起较粗短，有若干细小分支.　　2.3前庭损毁后GFAP在MVN区的表达左侧前庭损毁后，双侧在MVN区GFAP反应都增强，但损毁侧更为明显，反应的星形胶质细胞以原浆型为主，不同存活时间GFAP阳性细胞计数的比较如下:侧损毁术后10h，MVN区GFAP

7、反应较对照组增加（Fig1），且左侧强于右侧.术后20h，GFAP在MVN区反应强于10h（Fig2），左侧强于右侧;术后40h，GFAP在MVN区反应有所减弱，弱于20h（Fig3）;术后6～20dGFAP反应处于下降趋势（Fig4）.统计分析表明:前庭损毁组受损侧10h～20d前庭内侧核区GFAP阳性反应细胞数同正常对照组比较差别显著（P<0.01）;而未损侧10h～6d前庭内侧核区GF