豚鼠一侧前庭损毁后前庭内侧核gfap表达论文

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1、豚鼠一侧前庭损毁后前庭内侧核GFAP表达论文.freeledialvestibularnucleus（MVN）folloy（UL）.METHODSAftersectingleftlabyrinthectomy，theimmunohistologicalstainingofGFAPed.RESULTSGFAPstainingenhancementy.Hoeevident10hpost-ULandmunostainingintheMVN.Thefallintherestingdischargeoftheprim

2、aryvestibularaf-ferentsand/orinthedeafferentedcentralvestibularneuronsmaycausetheastrocyticreaction.Butthesignificanceofthereactivesatrocytesinthevestibularpensationisstillun-knoedialvestibularnucleus，MVN）区GFAP在一侧前庭损毁后表达的改变，并探讨其在前庭代偿过程中可能的作用.1材料和方法1.1材料健康成

3、年杂色豚鼠24只，体质量350～500g，雌雄不拘，随机分组:对照组（n=4）、术后10h组（n=4）、术后20h组（n=4）、术后40h组（n=4）、术后6d组（n=4）及术后20d组（n=4）.1.2方法①豚鼠以速眠新（846合剂）注射液（0.8mLkg-1）麻醉.取耳后下切口，暴露听泡并打开.以显微剥离子及吸引器打开前庭并破坏、吸除耳石器及壶腹嵴等，将浸有无水乙醇的明胶海绵涂布复达欣粉后置入前庭，缝合切口，造模完成，动物置于亮处恢复.动物养至预定时间以过量戊巴比妥纳麻醉，自左心室向主动脉插管，快速注入

4、生理盐水200mL冲洗，以40gL-1多聚甲醛600mL灌注固定.断头并剥除颅骨，取下脑干前庭核区及对应小脑区40gL-1多聚甲醛液中后固定，石腊包埋，切片厚4μm行GFAP免疫组化反应.②二步法免疫组化染色:为石蜡切片常规脱蜡至水化，微波抗原修复，30mLL-1H2O2灭活内源性过氧化物酶，胰酶消化10min，50mLL-1正常山羊血清封闭10min，倾去血清，加兔抗GFAP（博士得公司），4℃湿盒过夜，37℃复温1h，加入酶标二抗（DAKO，美国）恒温30min，DAB显色，苏木素复染，脱水、透明、封片

5、.免疫组化对照实验采用同等稀释度的正常家兔血清及血清稀释液替代GFAP抗体.③对照实验:包括以PBS或正常羊血清代替一抗.两种均未观察到特异性染色.④结果判定:阳性细胞记数标准为免疫染色阳性胞体，或无胞体但阳性胶质细胞突起向一中心点辐辏.各组动物取相同切面的切片3张，每组动物共记数12（4×3）张切片.每张切片在200倍率下选一个阳性细胞最多的视野记数.统计学处理:采用SAS软件行t检验.2结果2.1手术组动物的行为学特征所有列入实验组的动物术后均出现明确的单侧前庭外周损毁的行为学特征.这些特征包括:自发性

6、眼震，倾倒、头位偏斜及绕圈行为等，不典型者剔除.2.2对照组MVN区GFAP的免疫反应性对照组豚鼠MVN区观察到GFAP阳性星形胶质细胞，主要为原浆型星形胶质细胞（又称苔藓细胞）.突起较粗短，有若干细小分支.2.3前庭损毁后GFAP在MVN区的表达左侧前庭损毁后，双侧在MVN区GFAP反应都增强，但损毁侧更为明显，反应的星形胶质细胞以原浆型为主，不同存活时间GFAP阳性细胞计数的比较如下:侧损毁术后10h，MVN区GFAP反应较对照组增加（Fig1），且左侧强于右侧.术后20h，GFAP在MVN区反应强于1

7、0h（Fig2），左侧强于右侧;术后40h，GFAP在MVN区反应有所减弱，弱于20h（Fig3）;术后6～20dGFAP反应处于下降趋势（Fig4）.统计分析表明:前庭损毁组受损侧10h～20d前庭内侧核区GFAP阳性反应细胞数同正常对照组比较差别显著（P0.01）;而未损侧10h～6d前庭内侧核区GFAP阳性反应细胞数同正常对照组比较差别显著（P0.01），20d时与对照组差别不显著（P0.05）.3讨论星形胶质细胞在中枢神经系统中大量存在，其对前庭神经元执行正常功能是至关重要的，这些作用包括:填充于神

8、经元之间或起隔离和绝缘作用;监测中枢神经细胞间隙;参与调节水和离子的平衡，并参与神经元的正常代谢活动;对多种损伤均出现反应以及屏障作用［7］.鉴于星形胶质细胞功能繁杂及其重要性，在耳外周及中枢胶质细胞的研究逐渐增多.MVN在主要的前庭核中细胞密度最高，其主要功能是从半规管传递冲动至眼外肌运动核，它对于水平眼球运动的共轭调节可能具有特别的意义，而且它似乎有更宽阔的活动空间，适合于整合来自不同系统的神经冲动［11］.