葛根素诱导破骨细胞自噬的机制研究

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1、葛根素诱导破骨细胞自噬的机制研究［摘要］目的观察葛根素（Pur）对破骨细胞自噬的影响，探讨其诱导破骨细胞自噬的机制。方法采用骨髓干细胞分化的方式培养原代破骨细胞，并按加入Pur量的不同，分成10、50、100ug/L的Pur组和空白对照组，采用免疫印迹技术（Western-Blot）检测提取的自噬相关蛋白及Akt-mTOR通路相关蛋白的表迗。结果①10、50、100ug/L浓度的Pur组与空白对照组比较，其膜型与胞质型微管相关蛋白1轻链3的比值（LC3II/I）均升高（P1.4蛋白质印迹法（Western-blot）检测相关蛋白的表迗采用Western-Blot检测不同浓度Pur组和对照组LC

2、3II/I、p62、Akt、p-Akt和p-s6的蛋白表迗。提取各组细胞总蛋白，先用BCA（2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠）法进行蛋白定量测定。加入上样缓冲液，在95°C下变性10min。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳，转膜，5%脱脂奶粉封闭2h后，分别加入LC3、p62、Akt、p-Akt和p-s6单克隆抗体，在4°C环境下过夜，接着用TBST缓冲液洗膜3次，10min/次，加入二抗，在室温下孵育2h，再次用TBST缓冲液洗膜。将得到的膜与电化学发光（ECL）试剂充分反应后，曝光于X线胶片上，显影、定影、扫描后进行图像分析。应用Image-ProPlus6.0软件

3、对各个特异性条带进行累计吸光度检测，最后以积分吸光度值(IOD)来表不。1.5统计学方法采用SPSS17.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数土标准差(x士s)表示，采用OneHVayANOVA检验，以P本实验结果从分子水平上说明Pur有诱导破骨细胞自噬的作用，而Akt-mTOR信号通路可能是Pur诱导破骨细胞自噬变化的机制之一，但Akt-mTOR信号通路是否为其有效的主要通路，仍需后续实验从不同角度验证其作用，另外其他相关信号通路是否也参与此过程，还有待进一步研究。[参考文献][1]王新祥，张允岭，吴坚，等.葛根对睾丸切除骨质疏松模型小鼠骨密度和骨构造的作用[J].中国组织工程研究与临床康

4、复，2010，14(7)：1262-1266.[2]孙艳，王海燕，陈立忠，等.绝经后骨质疏松症常用中药的研究进展[J].中国现代医生，2015,53(1):158-160.[3]孔蓓蓓，刘连起，王新祥.近十年葛根防治骨质疏松症的研究进展[J].环球中医药，2012，5(3)：226-230.[4]WangC,MengMX,TangXL,etal.Theproliferation,differentiation,andmineralizationeffectsofpuerarinonosteoblastsinvitro[J].ChinJNatMed,2014，12(6)：436-442.[1]T

5、iyasatkulkovitW,CharoenphandhuN,WongdeeK，etal.UpregulationofosteoblasticdifferentiationmarkermRNAexpressioninosteoblast-likeUMR106cellsbypuerarinandphytoestrogensfromPuerariamirifica[J].Phytomedicine,2012，19(13)：1147-1155.[2]赖满香，任宏，唐省三.葛根素在共育体系中对破骨细胞活性的影响[J].中国中医药咨讯，2010，2(13)：192-193.[3]王训翠，王秀，李庆林.

6、伴侣自吞噬在MPP+损伤的SH-SY5Y细胞中的影响及葛根素的干预作用[J].中国中药杂志，2014，39(1)：106-112.[4]CejkaD，HayerS，NiederreiterB，etal.Mammaliantargetofrapamycinsignalingiscrucialforjointdestructioninexperimentalarthritisandisactivatedinosteoclastsfrompatientswithrheumatoidarthritis[J].ArthritisRheum,2010,62(8):2294-2302.[5]侯建明，蓝旭华，

7、吴晖南，等.近5年国内外骨质疏松症诊疗指南比较[J].中华关节外科杂志：电子版，2012,6(3)：472-478.[6]丁艳红.综合性护理在经皮椎体成形术治疗老年性骨质疏松性骨折中的应用[J].护理实践与研究，2015，12(3)：41-43.[1]谢栋，陈大军，马国亮.中医学健康管理预防原发性骨质疏松症的研究[J].解放军医药杂志，2014,26(6)：85-88.[2]楼肃亮，赵志芳，李小娟