自噬对糖基化终末产物诱导成骨细胞凋亡的作用

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1、媒介。骨组织中富含长寿命蛋白质，所以更容易受到AGEs的影响。大量研究表明AGEs能够诱导成骨细胞的凋亡。本研究的目的：lAGEs作用下成骨细胞的自噬水平的变化。2自噬对AGEs诱导的成骨细胞凋亡的作用3氧化应激在AGEs处理的成骨细胞凋亡与自噬过程中的作用。方法制备AGE并用羧甲基赖氨酸(CML)的EUSA试剂盒检测CML的浓度。用MTT法检测不同浓度AGEs处理后MC3T3．E1细胞增殖率的变化，筛选出合适的作用浓度。用Westem-b埘t以及免疫荧光检测不同时间AGEs处理后的MC3T3．El内自噬水平改变。自噬对AG

2、Es诱导凋亡的作用通过流式细胞仪检测自噬诱导剂或自噬抑制剂与AGEs共同作用下MC3T3．El细胞的ANNExⅢ．v和PI染色变化情况。细胞内RoS以及线粒体膜电位的改变分别应用DCFH．DA和JC．1试剂盒来检测。数据均以均数士标准差表示，采用SPSSl7．O软件包进行统计学处理，各组间比较采用单因素方差分析，样本均数间的两两比较采用LsD．t检验，以P

3、之，自噬的抑制剂进一步加重了MC3T3．El的凋亡。自噬诱导剂能够使得AGEs处理的MC3T3．E1细胞中ROS水平降低及线粒体损伤减少；自噬的抑制剂能够使得MC3T3．E1细胞中ROS水平增加及线粒体的损伤增加。在ROS的抑制剂与AGEs混合处理的MC3T3．El中其自噬表达较AGEs单独组明显减低，差异具有统计学意义。结论1．自噬在AGEs处理的成骨细胞中普遍表达，并且随着AGEs作用时间的延长而增高。2．通过自噬诱导剂及抑制剂对成骨细胞凋亡的影响，得出自噬对AGEs所诱导的成骨细胞凋亡起到保护作用3．ROS以及被其损伤

4、的线粒体的清除作用是自噬保护AGEs处理的成骨细胞凋亡的重要环节。反之细胞内ROS水平的增高是自噬启动的重要因素。关键词糖基化终末产物，自噬，凋亡，ROS，线粒体膜电位2beellwelldiscussed．AdVaIlccdglycationendproduCts(AGE)arefomedinlon争liVedm枷xproteinsbyanoneI屹ymaticreactionwithsugar．N-(carboxylIlethyl)1ysine(CML)ist11e研ma叫stmctI鹏charactIeristican

5、dfimctionalsiteofAGEs．TheleVelofAGEsinhmaIlwillbe(1raSticallyincreasedwithtlleincm够eofageoru11derSpecialconditiollssuch嬲diabetes锄dn肺or．IthasbeenShownthatAGEsis陀sponsibleformepathogeIlesisofosteopellia．oneofthemechaIlismistllatAGEsC0uldinduceapoptosisinosteoblaSts．H

6、oweVer'thechangesofaut叩hagyinosteoblaStstreatedwithAGEsandthee仃ectofautophagyonapoptosisinducedbyAGEsstillreInaineduIll(Ilown．mthecI】l仃∞tstudy’廿leaimofmeexperimentistodetectthech锄gesofautophagyinosteoblasticMC3T3一E1cellsuIlderthetre锄踟tofAGEsaIldtheeffectofautophag)

7、ronapoptosis．Funhemlore，wealsodiscussedtlleroleROSplayedintheinteractionbetwe锄autophagyandapoptosis．Methods1．Pre=parationofAGEsa11devaluationofAGEsbyCMLELISAkit．Pr印arationofAGEswaspe而啪edasKislingerTdesc—bediIl1999．AGEswasdetectedbyCMLELISAkit．2．CellViabilitywasdete

8、加inedbyMTT．3Brieny，cellswereplatedatscedingosteoblaSticMC3T3-Elcellsandt11ecellswere仃eatedwimdifj6：relltdoesofAGEsfor24hours．ThcreaRer，lO山ofMTTso