基于正交实验优化创伤弧菌金属蛋白酶融合蛋白的表达.doc

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1、基于正交实验优化创伤弧菌金属蛋白酶融合蛋白的表达【摘要】目的：对创伤弧菌金属蛋白酶融合蛋白表迗条件进行优化，从而获得高效稳定的金属蛋白酶原核表达系统。方法：质粒pET_32a-vvp转化/DE3后，针对诱导过程中对工程菌表达蛋白产生影响的4个因素诱导时间、诱导温度、诱导剂浓度以及诱导时摇菌的转数，运用统计学软件进行正交实验设计，对结果进行直观分析及方差分析，并对实验得出的最佳搭配诱导条件进行验证。结果：直观分析表明摇菌转数的R值最大，其次为诱导时间和诱导温度，诱导剂IPTG浓度的R值最小；方差分析表明摇菌转数的P值小于

2、，而时间因素、温度及IPTG浓度的P值均大于。结论：摇菌转数为主要因素，其次为诱导时间，而诱导温度和诱导剂IPTG浓度对实验结果影响不明显。本实验的最佳搭配诱导条件为摇菌转数250r/m、诱导时间4h、诱导温度37°C、诱导剂IPTG浓度lmmol/L。在此诱导条件下，金属蛋白酶的表迗量高迗％。【关键词】创伤弧菌；金属蛋白酶；正交设计；直观分析；方差分析onofrecombinantmetriovulnificusin/DEthod：TheplasmidofAbstractObjective：Tooptimizethe

3、expressialloproteaseofVvib3inducedbyIPTG.MepET-32a-vvp/wascon基于正交实验优化创伤弧菌金属蛋白酶融合蛋白的表达【摘要】目的：对创伤弧菌金属蛋白酶融合蛋白表迗条件进行优化，从而获得高效稳定的金属蛋白酶原核表达系统。方法：质粒pET_32a-vvp转化/DE3后，针对诱导过程中对工程菌表达蛋白产生影响的4个因素诱导时间、诱导温度、诱导剂浓度以及诱导时摇菌的转数，运用统计学软件进行正交实验设计，对结果进行直观分析及方差分析，并对实验得出的最佳搭配诱导条件进行验证。结

4、果：直观分析表明摇菌转数的R值最大，其次为诱导时间和诱导温度，诱导剂IPTG浓度的R值最小；方差分析表明摇菌转数的P值小于，而时间因素、温度及IPTG浓度的P值均大于。结论：摇菌转数为主要因素，其次为诱导时间，而诱导温度和诱导剂IPTG浓度对实验结果影响不明显。本实验的最佳搭配诱导条件为摇菌转数250r/m、诱导时间4h、诱导温度37°C、诱导剂IPTG浓度lmmol/L。在此诱导条件下，金属蛋白酶的表迗量高迗％。【关键词】创伤弧菌；金属蛋白酶；正交设计；直观分析；方差分析onofrecombinantmetriovu

5、lnificusin/DEthod：TheplasmidofAbstractObjective：TooptimizetheexpressialloproteaseofVvib3inducedbyIPTG.MepET-32a-vvp/wasconstruetedbyourlaborntfactors,includinagitationspeedandconcentrationofIPTGogonalexperimentaleanalyzedbydirectcmethod.Results：Tatory.Fourdiffer

6、egtime,temperature,,werestudiedbyorthdesign.ThedataweralculationandANOVAheRvalueofagitationrateresultingfromashighestamongfourofagitationratewaseoftheotherfactorselusions：TheexpreableaffectedbytheaxpressionlevelofVVhenagitationrateisehaveestablishedamdirectcalcu

7、lationwfactors.ThePvaluelowerthanThePvaluwerehigherthanConssionlevelisremarkgitationrate.TheePprotEinishighestw250rpm.Thereforewethodforhigh-levelexpressionofVVP-fourhours-inducingtime,37°C-inducingtemperature,lmmol/LconcentrationofIPTGaibriovulnificus；mndagitat

8、ionratein250rpm.Keywordsvetalloprotease；orthogonalexperimentaldesign；directanalysis；analysisofvariance(ANOVA)很多临床病例及动物实验已经证明，进食被创伤弧菌污染的食物或者皮肤破损接触Vv均可引起Vv感染，主要表现为严重的蜂窝