创伤弧菌溶细胞素融合蛋白诱导人caco2细胞il8表达的研究

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1、万方数据温州医学院硕士学位论文目录

2、lIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIiilll11111IY2691955中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5第一部分材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18第二部分材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49万方数据温州医学院硕士学位论文目的：方法：结果：结论：关键词：创伤弧菌溶细胞素融合蛋白诱导人Caco一2细胞IL-8表达的研究中文摘要研究创伤弧菌溶细胞素融合蛋白(rVvhA)诱导人肠上皮细胞(humanintestinalepithelialcell，Caco-2)IL．8表达的作用，对于了解创伤弧菌所弓发的粘膜屏障免疫有极为重要的意义，为仓lJ伤弧

4、菌溶细胞素的细胞毒性机制提供一些实验依据。1．诱导含pET-28a(+)vvhA重组质粒的BL2I大肠杆菌表达创伤弧菌溶细胞素融合蛋白rVvhA，应用Ni2+-NTA亲和层析对rVvhA进行纯化，通过分步稀释与透析复性相结合方法对纯化后蛋白进行复性。2．将rVvhA作用于人Caco-2细胞，应用CCK．8法测试复性后rVvhA细胞毒活性。发现在1．5H【『／ml浓度时，抑制Caco-2细胞生长明显。3．RT-PCR检测rVvhA作用Caco-2细胞后IL一8mRNA的表达、ELISA检测细胞培养上清Ⅲ．8分泌量。1．含pET-28a(+)vvhA重组质粒的BL21大肠杆菌经0．5mm

5、ol／LIPTG30。C诱导4h后表达的融合蛋白分子量约为54kDa，电泳结果与该蛋白的理论预测值基本一致，表达量约为67％。表达的蛋白包涵体经三步洗涤与Ni2+-NTA树脂纯化后，纯度达99％。2．纯化后的rVvhA经复性液复性后，作用于Caco-2细胞，发现rVvhA有细胞毒活性，能降低Caco-2细胞存活率，呈时间剂量依赖性。3．RT-PCR检测出rVvhA作用Caco-2细胞后IL．8mRNA表达上调，rVvhA有效作用浓度为O．4HIJ／ml，效应时间为30min；上清中几．8分泌量上调时相在4h。rVvhA在转录水平上诱导人Caco-2细胞IL-8mRNA表达，促进IL-

6、8的合成，在创伤弧菌引起的过度炎症反应和败血症的发生、发展中有着重要意义。创伤弧菌；溶细胞素；rVvhA；人Caco．2；IL．8万方数据温州医学院硕士学位论文InductionofInterleukin．8ProductioninHumanIntestinalEpithelialCellsStimulatedbyVvhAFusionProteinAbstractObjectiveThisstuayaimedatinvestigatingtheeffectofV．vulnificusfusionprotein(rVvhA)infectiononproductionofintedeuk

7、in(几一8)，akindofproinflarnmatorycytokine，inhumanintestinalepithdialCaco-2cells．ResearchontheinteractionbetweenVvulnificusandepithelialcellsisimportantforundersmndingofboththeimmunologyofmucosalsurfacesandVvulnificus．Methods1．ExpressiontheprokaryoticexpressionvectorpET28a(+)-whAinE．coliBL21fOE3)；

8、purificationandrenaturationofrVvhA．TheE．coliBL21(DE3)wereinducedby0．5mmol／LIPTGthentheexpressionproductwasidentificatedandanalyzedbySDS-PAGE．Theexpressionproductwhichwasmajorconsistedofcytorycteswaswashed谢tllSolutionI，SolutionII，S