西安地区汉族亚甲基四氢叶酸还原酶的两种基因多态性

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1、西安地区汉族亚甲基四氢叶酸还原酶的两种基因多态性【关键词】聚酶链反应　　【Abstract】AIM:TofindouttorphismsofMTHFRamongtheHanpeopleinXianarea.METHODS:PCRRFLPtechniqueorphismsofMTHFR.RESULTS:Theallelefrequenciesof677Tand1298Cozygotefrequenciesof677TTand1298CCutationsorphismofMTHFRfromourstudyisdif

2、ferentfromthosepreviouslyreportedbyothers,ayduetodifferencesbetorphism　　【摘要】目的：了解西安地区汉族人MTHFR基因C677T和A1298C两个位点的遗传多态性.方法：应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCRRFLP）调查西安地区96个汉族人的基因型分布.结果：677T等位基因的分布频率为45%，TT纯合子占18%；1298C等位基因的分布频率为20%.CC合子占3%；双杂合子677CT,1298AC占21%.结论：调查显示这两个位点

3、的遗传多态性与文献报道不同，可能具有群体差异性.　　【关键词】限制性片段长度多态性；亚甲基四氢叶酸还原酶；基因，聚酶链反应　　0引言　　亚甲基四氢叶酸还原酶（5，10methyleetrahydrofolatereductase，MTHFR）是人体内同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）复甲基化的关键酶.由于MTHFR基因缺陷，造成该酶活性障碍，会影响体内同型半胱氨酸的正常代谢，使其血液浓度增高［1］.而大量研究表明，体内Hcy浓度每升高5μmol・L-1，男、女患冠心病的风险就会分别增

4、加1.6和1.8倍［2］.除此以外，高浓度的Hcy还是其他动静脉血栓形成及神经管缺陷的致患因素［3，4］.经过十余年的研究，现已发现人类MTHFR的15种点突变类型［5］.其中最常见最重要的一个是第677位C→T突变.此位点多态性不仅可以引起酶活性下降，还与MTHFR的热敏感性有关［6］，是上述疾病的易感因子.A1298C是该基因的另一个常见多态位点，此点突变也影响酶的活性，但与热敏感性无关［4］.不同国家和地区的多项研究表明，人群中MTHFR基因C677T多态和A1298C多态的分布存在群体差异，这种差异可能

5、造成人群对疾病的易感性不同.本研究我们应用PCRRFLP技术检测这两处突变，了解西安地区汉族人MTHFR基因的分子遗传学特征.　　1对象和方法　　1.1对象200111/200206间选取96(男58，女38)例，年龄37～78(平均57.29)岁.互无血缘关系的汉族健康者，在西安地区长期居住(20a以上).　　1.2材料DNA抽提试剂：STE液（10mmol・L-1TrisHCL,pH8.0;100mmol・L-1NaCl,1mmol・L-1乙二胺四乙酸二钠(EDTA

6、),100mL・L-1Tmol・L-1Tris,pH7.5;0.15mol・L-1KCl;5mmol・L-1MgCl2），100g・L-1十二烷基磺酸钠(SDS)，4mol・L-1NaCl,无水乙醇，700mL・L-1乙醇，饱和酚氯仿，TE缓冲液（10mmol・L-1TrisHCL,pH8.0;1mmol・L-1EDTA）.PCRRFLP试剂①C677T引物P1：5′TTTGAGGCTG

7、ACCTGAAGCACTTGAAGGAG，P2：5′GACTGGTAGCCCTGGATGGGAAAGATCCCG，A1298C引物P3：5′CTTTGGGGAGCTGAAGGACTACTAC，P4：5′CACTTTGTGACCATTCCGGTTTG（上海生工合成）；②4×dNTPs,MgCl2,10×Buffer,Taq酶（购自华美）；③限制性内切酶HinfI,MboⅡ（日本TaKaRa公司）；④25g・L-1琼脂糖和200mL・L-1聚丙烯酰胺、溴化乙锭.主要仪器：PCR扩增仪（P

8、E公司，480型）等.　　1.3方法　　1.3.1酚氯仿法提取DNA采柠檬酸钠抗凝血2mL，用STE细胞裂解液使红细胞肿胀破裂，离心沉淀白细胞后，TKM重悬，依次加入SDS及NaCl破解白细胞，使蛋白析出，用饱和酚氯仿抽提1~2次，取上清加冰无水乙醇使DNA析出，12000g离心30s后以700mL・L-1乙醇洗去盐，晾干，最后用TE缓冲液（10∶1）60μL溶解DNA.