西安地区汉族亚甲基四氢叶酸还原酶的两种基因多态性论文

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1、西安地区汉族亚甲基四氢叶酸还原酶的两种基因多态性论文【关键词】聚酶链反应【Abstract】AIM:TofindouttorphismsofMTHFRamongtheHanpeopleinXianarea.METHODS:PCRRFLPtechniqueorphismsofMTHFR.RESULTS:Theallelefrequenciesof677Tand1298Cozygotefrequenciesof677TTand1298CCutationsorphismofMTHFRfromourstudyisdifferentfromthosepreviouslyr

2、eportedbyothers,ayduetodifferencesbetorphism【摘要】目的：了解西安地区汉族人MTHFR基因C677T和A1298C两个位点的遗传多态性.方法：应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCRRFLP）调查西安地区96个汉族人的基因型分布.结果：677T等位基因的分布频率为45%，TT纯合子占18%；1298C等位基因的分布频率为20%.CC合子占3%；双杂合子677CT,1298AC占21%.结论：调查显示这两个位点的遗传多态性与文献报道不同，可能具有群体差异性.【关键词】限制性片段长度多态性；亚甲基四氢叶酸还原酶；基因，

3、聚酶链反应0引言亚甲基四氢叶酸还原酶（5，10methyleetrahydrofolatereductase，MTHFR）是人体内同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）复甲基化的关键酶.由于MTHFR基因缺陷，造成该酶活性障碍，会影响体内同型半胱氨酸的正常代谢.freelolL-1，男、女患冠心病的风险就会分别增加1.6和1.8倍［2］.除此以外，高浓度的Hcy还是其他动静脉血栓形成及神经管缺陷的致患因素［3，4］.经过十余年的研究，现已发现人类MTHFR的15种点突变类型［5］.其中最常见最重要的一个是第677位C→T突变.此位点多态性不仅可以引起酶

4、活性下降，还与MTHFR的热敏感性有关［6］，是上述疾病的易感因子.A1298C是该基因的另一个常见多态位点，此点突变也影响酶的活性，但与热敏感性无关［4］.不同国家和地区的多项研究表明，人群中MTHFR基因C677T多态和A1298C多态的分布存在群体差异，这种差异可能造成人群对疾病的易感性不同.本研究我们应用PCRRFLP技术检测这两处突变，了解西安地区汉族人MTHFR基因的分子遗传学特征.1对象和方法1.1对象200111/200206间选取96(男58，女38)例，年龄37～78(平均57.29)岁.互无血缘关系的汉族健康者，在西安地区长期居住(20a以

5、上).1.2材料DNA抽提试剂：STE液（10mmolL-1TrisHCL,pH8.0;100mmolL-1NaCl,1mmolL-1乙二胺四乙酸二钠(EDTA),100mLL-1TmolL-1Tris,pH7.5;0.15molL-1KCl;5mmolL-1MgCl2），100gL-1十二烷基磺酸钠(SDS)，4molL-1NaCl,无水乙醇，700mLL-1乙醇，饱和酚氯仿，TE缓冲液（10mmolL-1TrisHCL,pH8.0;1mmolL-1EDTA）.PCRRFLP试剂①C677T引物P1：5′TTTGAGGCTGACCTGAAGCACTTGAAGG

6、AG，P2：5′GACTGGTAGCCCTGGATGGGAAAGATCCCG，A1298C引物P3：5′CTTTGGGGAGCTGAAGGACTACTAC，P4：5′CACTTTGTGACCATTCCGGTTTG（上海生工合成）；②4×dNTPs,.freelLL-1聚丙烯酰胺、溴化乙锭.主要仪器：PCR扩增仪（PE公司，480型）等.1.3方法1.3.1酚氯仿法提取DNA采柠檬酸钠抗凝血2mL，用STE细胞裂解液使红细胞肿胀破裂，离心沉淀白细胞后，TKM重悬，依次加入SDS及NaCl破解白细胞，使蛋白析出，用饱和酚氯仿抽提1~2次，取上清加冰无水乙醇使DNA析

7、出，12000g离心30s后以700mLL-1乙醇洗去盐，晾干，最后用TE缓冲液（10∶1）60μL溶解DNA.1.3.2PCRRFLP法检测基因型C677T：PCR反应体系25μL，含5nmolL-1的引物，200μLL-1的dNTPs，25mmolL-1MgCl2，10×Buffer，2UTaq聚合酶及100ng基因组DNA.反应条件：95℃5min→（95℃30s,65℃30s,72℃15s）×35→72℃7min.扩增产物长度为173bp.限制性内切片段多态性分析(RFLP)：总体积10μL,加4UHinfI及10×Buffer，37℃消化过夜，产物经2

8、5gL-1琼脂糖凝胶电泳