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《亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与低出生体重关系论文》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与低出生体重关系论文吴涤李静杨艳芳关明杰王琨秦荣【摘要】目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性与新生儿低出生体重的关系。方法采用病例对照研究方法,收集108例正常体重儿和57例低出生体重儿和母亲的流行病学资料及母亲的静脉血标本,用PCRRFLP方法分析母亲MTHFR基因型,采用Iogistic回归法分析母亲MTHFR基因型与新生儿出生体重的关系。结果调整主要混杂因素后,未发现MTHFRCT/TT基因型与低出生体重之间存在统计学关联(OR=1.13,95%
2、CI:0.61~1.78)。结论母亲MTHFR基因多态性与低出生体重不存在统计学关联。【关键词】亚甲基四氢叶酸还原酶;多态性;基因;低出生体重【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheassociationbetorophismsofthemethyleetrahydrofolatereductasegene(MTHFR)inmotherandloalbirthinisteredtocollectdemographicandrelevantinformation.Bloo
3、dsamplesmothersofbothgroups.PCRRFLPmethodineMTHFRpolymorphisms.LogisticregressionorphismsofMTHFRgeneinthemotherandloentforthemainconfoundingfactors,nostatisticalassociationorphismsofMTHFRgeneandloorphism;Gene;Loethioninehomocysteine,MetHcy)代谢异常引起的血管
4、病变可导致胎儿宫内发育迟缓2。亚甲基四氢叶酸还原酶(methyleetrahydrofolatereductase,MTHFR)为同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)代谢途径的关键酶,MTHFR基因突变可使酶活性下降,造成血中Hcy增高。本研究通过检测母亲MTHFR基因多态性,探讨该基因突变与新生儿出生体重的关系,为低出生体重发生机制研究提供科学依据。对象与方法一、对象2003~2006年在包钢集团第三职工医院住院分娩的108例正常体重儿(正常组)和57例低出生体重儿(低出生体重组)及其
5、母亲。低出生体重儿的入选标准:(1)孕周28周,体重2500g;(2)正常分娩,剔除意外情况引起的早产儿;(3)剔除双胎或多胎、先天畸形儿。正常体重儿入选标准:选择同一医院出生的孕周≥28周、体重≥2500g、出生时间相差7d、单胎正常活产婴儿;2组剔除妊娠期有合并症及并发症孕妇和新生儿。二、方法1.问卷调查:项目课题组成员根据文献检索结果,考虑影响出生体重的相关因素设计调查问卷。采用统一问卷调查表,由经培训的调查员对每个孕妇进行面对面询问调查,获得详细社会人口学资料,同时询问母亲怀孕期间情绪、紧张
6、程度、多梦、失眠状况、家人关照程度及怀孕期间每天使用计算机时间、看电视时间等自我感觉和行为因素。根据产房病例记录新生儿出生孕周、出生体重。母亲体重和血压为孕前健康体检时所检测结果。2.血样收集及DNA提取:用EDTA抗凝管经无菌操作取母亲外周血2ml,4℃保存,24h内按标准法3提取基因组DNA。3.基因型检测:(1)MTHFR(C677T)。聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR)扩增引物5’CAAAGGCCACCCCGAAGC3’5’AGGACGGTGCGG
7、TGAGAGTG3’(引物由上海生物工程公司合成)。12.5μlPCR反应体系中含有10×Buffer(Mg2+15mmol/L)1.25μl,.freelmol/L)0.25μl,上游引物(5μmol/L)0.1μl,下游引物(5μmol/L)0.1μl,基因组DNA2.0μl,TaqDNA聚合酶(2MU/L)0.5μl,灭菌双蒸水8.3μl。反应条件为94℃、5min,94℃、45s,62℃、40s,72℃、45s,扩增35个循环,最后72℃延伸7min。PCR扩增产物245bpDNA片段。(
8、2)限制性内切酶消化。PCR扩增产物10μl,酶切缓冲液2μl,无菌去离子水7.5μl,HinfI限制性内切酶5U,37℃水浴酶切6h,2%琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色(TaqDNA聚合酶、dNTPMixture、Marker、购自大连TaKaRa宝生物公司,琼脂糖等试剂购自上海生物工程公司)。CC基因型显示245bp片段;CT基因型显示245bp、175bp、70bp3条片段;TT基因型显示175bp和70bp2条片段。4.统计学处理:用SPSS11.0统计软件进行