超纯质粒小提中量试剂盒说明书

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1、杭州新景生物试剂开发有限公司区地址：浙江省杭州市西湖科技经济园金蓬街366号1幢东4F邮编：310030电话：0571-87381295传真：0571-87381297超纯质粒小提中量试剂盒说明书产品组成超纯质粒小提中量试剂盒Cat.No.4次样品100600450次制备1006050核酸纯化柱2ml离心管RNaseABufferIBufferⅡBufferNBufferP1BufferBPBufferW2（浓缩液）BufferE说明书4个4个*2.1ml2.1ml4ml6ml4ml3ml1ml1份50个50个56m

2、l28ml28ml45ml65ml45ml40ml11ml1份*4次样品中的RNaseA已加入到BufferI中。产品储存1．RNaseA可室温运输，收到产品后请将RNaseA置于2-8℃贮存。2．加入RNaseA的BufferI请置于2~8℃贮存。如果BufferI储存时间超过6个月，需补加RNaseA至终浓度为100μg/ml。3．其他试剂与物品如果储存于室温（15~25℃），可在两年内保持使用性能无明显变化；如果将产品储存于2~8℃，可延长产品的有效期至两年以上（2~8℃储存的产品使用前应先使产品恢复到室温后再

3、使用）。技术支持杭州新景生物试剂开发有限公司研发部：e-mail:technical@simgen.cn,电话：400-0099-857。产品介绍本试剂盒适合于从5～15ml细菌培养物（LB培养基）中提取多至30mg超纯质粒DNA。在传统碱裂解法分离质粒的基础上，试剂盒辅以有机溶剂萃取及柱纯化核酸技术，彻底去除质粒DNA中可能含有的细菌脂多糖、脂质、蛋白质、细菌代谢产物和色素，纯度接近两次氯化铯超密度梯度超离心法制备的质粒DNA。适用于真核细胞的转染、动物模型的基因治疗、酶修饰、细菌转化、体外转录与翻译、序列测定、D

4、NA结构与功能分析等分子生物学实验。用户需自备的试剂与物品1．无水乙醇2．5ml离心管、有盖2ml离心管、移液器及吸头3．一次性手套及防护用品和纸巾4．台式高速小量离心机（可配离心1.5ml离心管和2ml离心管的转子）及台式低速离心机(可配5ml离心管的转子)5．旋涡震荡器、烘箱使用前准备1）向装有RNaseA的离心管中加入1mlBufferI，混匀后再将溶液吸回到装有BufferI的瓶子中，并在标签的方框中打勾作好“RNaseA已加”的标记，置于2~8℃保存。2）根据试剂瓶标签上的指示在BufferW2中加入无水乙

5、醇，并在标签的方框中打勾作好“乙醇已加”的标记。3）当室温低于15℃时，使用BufferII前应先观察试剂是否有白色沉淀产生，如有沉淀则应于37℃水浴直至沉淀溶解后再使用。www.simgen.cn仅供科研使用，请勿用于人体及动物的治疗或临床诊断。Ver.2杭州新景生物试剂开发有限公司区地址：浙江省杭州市西湖科技经济园金蓬街366号1幢东4F邮编：310030电话：0571-87381295传真：0571-87381297操作步骤：注意：各操作步骤中的Buffer必须精确地按指定的用量加入，否则可能导致分相失败！1）

6、用自备的5ml离心管5000rpm离心5分钟收集5-15ml过夜培养的细菌，弃尽培养基。加入450μl已加入RNaseA的BufferI，充分悬浮细菌沉淀。*可用旋涡振荡器振荡或用移液器多次吸打的方法悬浮沉淀的细菌块。充分悬浮的细菌呈均一的悬浊液，不应留有可见的小菌块，否则将严重影响最后质粒的产量。2）加入450μlBufferII，温和并充分地翻转离心管4-6次。*使用BufferII前确认溶液中没有可见沉淀存在；BufferII使用完后应盖紧瓶盖，避免与空气长期接触。*此步骤不可用旋涡振荡器混匀，否则将导致最后制

7、备的质粒中混有基因组DNA。*当细菌裂解充分时，溶液应呈粘稠的半透明状；如果达不到上述效果，可能为细菌用量过多所至，可增加翻转的次数以达到细菌充分裂解的效果。*此步骤不应超过5分钟。3）加入800μlBufferN，温和地翻转离心管直至溶液中残留的蓝色沉淀全部转变为淡黄色沉淀。*此步骤不可用旋涡振荡器混匀，否则将导致最后制备的质粒中混有基因组DNA。4）加入1.2mlBufferP1，温和地上下翻转10次，再稍用力混合数次使溶液形成混浊的乳浊液，5000rpm离心1分钟。在一个自备的2ml离心管中，加入800μlBu

8、fferBP备用。5）吸取无色下相转移到装有BufferBP的2ml离心管中，混合均匀。*下相转移方法：吸弃大部分上相（无须吸尽上相并换吸头），再用吸头将相间沉淀拨到一边，吸取下相。*在转移无色下相的过程中偶有混入的上相，可在吸头内迅速分相，连同吸头一起丢弃。（见图示）吸取下相带入的上相在吸头内分相转移下相弃上相与吸头6）吸取850μl步骤5）