预封装·质粒小提试剂盒说明书

《预封装·质粒小提试剂盒说明书》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、预封装·质粒小提试剂盒（48孔板）预封装·质粒小提试剂盒（48孔板）PlasmidDNAExtractionKit(MagneticBeads)目录号：PDEP-P-5001运输条件：2~25℃；保存条件：主试剂板2~8℃，①、③、④、⑤号溶液2~8℃保存，其他组分室温；试剂盒组成：KitComponent试剂盒组成4块板适用于16*4份样品24块板适用于16*4份样品试剂①PDEP-Buffer1质粒悬浮液15mL80mL②PDEP-Buffer2质粒裂解液15mL80mL③PDEP-Buffer3质粒复性液

2、25mL150mL④EluteBuffer洗脱液5mL10mL⑤RNaseA100mg/mL60μL320μL预封装部分试剂板16T/板*4板16T/板*24板耗材磁棒套2个/包*4包2个/包*24包特别说明：1）使用前请将⑤RNaseA全部加入①PDEP-Buffer1中，并置于4℃保存；2）使用前先检查②PDEP-Buffer2是否出现浑浊，如有混浊现象，置于37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。②PDEP-Buffer2和③PDEP-Buffer3使用后应立即盖紧盖子；3）本操作指南经公司反复验证，使用前请仔细

3、阅读，并且按照操作指南的建议操作。4预封装·质粒小提试剂盒（48孔板）【产品简介】试剂盒中独特分离作用的磁珠和缓冲液系统，可从2.0~5.0mL菌液中分离纯化10~20μg高质量质粒DNA。磁珠表面修饰有特殊化学基团，在一定缓冲液体系中对质粒DNA具有极强的特异性亲和力，而当缓冲液体系改变时，磁珠可逆地释放质粒DNA，从而达到快速分离纯化质粒DNA的目的。此外，复性液中含有特殊磁珠，可最大限度的特异性结合并去除蛋白质及其它杂质，从而保证提取质粒DNA的纯度。本试剂盒适用于直接在48孔板中完成摇菌、收菌、重悬、裂

4、解和复性，预分装的试剂板直接在自动化核酸提取仪上完成质粒DNA提取，大大降低了实验人员的工作量以及实验中的人为误差。使用本试剂盒提取的质粒DNA可用于各种分子生物学实验，如酶切、测序、文库筛选、连接和转化等。【注意事项】1．试剂板严禁反复冻融，以免磁珠受到损害；2．所有离心步骤均为室温下进行，其中复性步骤冷冻离心效果更佳；3．提取的质粒DNA量与细菌的培养浓度、宿主菌、质粒拷贝数等因素有关；4．复性液使用前需充分摇匀使磁珠充分重悬；5．质粒复性后的离心步骤应尽可能轻拿轻放48孔板（保证蛋白质和基因组沉淀紧附于4

5、8孔板底部），以避免转移上清液时吸取到杂质；6．试剂板使用前务必颠倒混匀使磁珠充分重悬；7．试剂板使用前务必使用甩板机进行离心（500rpm*1min），使试剂及磁珠集中到孔板底部；8．使用前小心撕去铝箔封口膜，避免孔板振动，防止液体溅出。【试剂盒说明】样品类型样品量DNA提取范围单样品提取时间菌液1.0~5.0mL10~20μg<40min【自备仪器和试剂】1.英芮诚ETP-300型核酸提取仪；2.涡旋混合仪；3.甩板机；4.离心机。4预封装·质粒小提试剂盒（48孔板）【仪器自动提取操作步骤】（以英芮诚ETP

6、-300型全自动核酸提取仪为例，同步可完成32个样本的提取）1．准备1）从试剂盒中取出独立包装的试剂板，用甩板机（500rpm离心1min）使试剂及磁珠都集中到孔板底部，使用前小心撕去铝箔封口膜，避免孔板振动，防止液体溅出。2）将⑤RNaseA全部加入溶液①PDEP-Buffer1中，将其与③PDEP-Buffer3于4℃保存待用。2．收集菌体将48孔板培养的菌液做好记录，4000rpm离心5min收集菌体，弃培养液，将离心后的48孔板倒扣在清洁的吸水纸上数次，尽量去除残留的培养液。备注：不同品牌和型号的甩板机

7、离心效果或有差异，请在收菌时和复性后离心时确保沉淀紧附于48孔板底。3．菌体悬浮向收集好的菌体沉淀中加入200μL①号溶液（质粒小提悬浮液），将48孔板在4000rpm下涡旋混合1~2min，确保菌体彻底重悬。4．菌体裂解：2min向菌体悬浮液中加入200μL②号溶液（质粒小提裂解液），开始2min倒数计时，将48孔板在400~500rpm温和涡旋混合1min，使菌体充分裂解，直到裂解液基本澄清，静置至2min倒计时结束。备注：如果菌体较多，可以适当延长裂解时间至4min，但不宜超过4min，菌体裂解时间过长会

8、使质粒难以复性。5．质粒复性：向菌体裂解液中加入350μL③号溶液（质粒小提复性液）；将48孔板在700rpm温和涡旋混合1min，充分混匀，比较好的状态是整个孔板内的沉淀为蛋花状。将48孔板在甩板机上4000rpm低温离心15min，若沉淀未贴附于孔板底部，继续离心5min，使之在孔道底部形成白色沉淀。备注：(1)③号溶液（质粒小提复性液）务必提前4℃冷藏，并且每次吸取前尽量摇晃均匀