质粒小提2011-3-24

《质粒小提2011-3-24》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、TM上海莱枫生物科技有限公司网址：www.lifefeng.com订货电话：021-25966877传真：021-54252754技术解答：shanghai@lifefeng.com技术支持：400-600-1087,13817902990(上海)质粒DNA小量提取试剂盒一、产品简介采用SDS碱裂解法，结合硅胶膜选择性吸附DNA的方法，适合从1-4ml细菌培养物中提取多至20μg质粒DNA。纯化的质粒DNA适合用于酶切、PCR、测序、转化和转染等分子生物学实验。本试剂盒改进了裂解条件(BufferP2)，避免菌量极少时或

2、者菌液过度老化时可能出现的单链质粒DNA；优化了中和环境(BufferP3)，提高裂解速度，能最大程度释放质粒DNA，并且减少因为机械力损伤的原因造成的基因组DNA污染和质粒DNA断裂。从4-16ml细菌培养物中提取质粒DNA，请选择质粒DNA小量中提试剂盒Cat#DK302。二、试剂盒组成和储存组成内容DK301-01(50次)DK301-02(200次)RNaseA1＊30μl120μlBufferP115ml60mlBufferP215ml60mlBufferP320ml80mlBufferWA§19ml75mlB

3、ufferWB§16ml65mlDNA吸附柱-B50个200个收集管50个×2200个×21.5ml离心管(用于洗脱)50个200个TE※15ml30ml说明书1份1份＊RNaseA1:50mg/ml,-20℃长期保存；第一次使用前将RNaseA1全部加入BufferP1中，于4℃保存。§BufferWA和BufferWB，第一次使用前按试剂瓶所示体积加入无水乙醇或者95%乙醇，混合均匀。※TE：10mMTris-HCl,0.1mMEDTA,pH8.0(25°C)。除RNaseA1和BufferP1(已加入RNaseA1

4、)外，其他组成成分于室温储存。三、注意事项1.BufferP2、BufferP3和BufferWA含刺激性化合物，避免沾染皮肤、眼睛和衣服、谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛，立即使用大量水或生理盐水冲洗沾染处，必要时寻求医疗咨询。2.每次使用后应及时盖紧试剂瓶盖子，以免影响下次使用效果。3.操作步骤2，充分悬浮细菌，无可见的块状菌团，不然会影响裂解效果。4.操作步骤3，缓慢翻转离心管，避免机械力打断基因组DNA而导致最后纯化的质粒DNA中有基因组DNA污染，同时避免打断质粒DNA，保持其完整性。5.操作步骤3，菌量极少或者

5、菌液过度老化时(培养时间过长或者放置时间过长)，溶液迅速呈透亮状后，需立即加入BufferP3，避免质粒DNA长时间暴露于BufferP2（强碱性环境）中完全变性为单链DNA后，无法恢复为超螺旋结构。6.操作步骤4，形成紧实的(不粘稠的)凝集物前需缓慢摇晃离心管，避免机械力打断基因组DNA和质粒DNA；形成紧实的凝集物后，基因组DNA被包裹进入凝集物，质粒DNA恢复超螺旋结构，快速剧烈摇晃3次不会打断基因组DNA和质粒DNA。快速剧烈摇晃3次的目的是将凝集物打散有利于离心沉淀去除，并且将凝集物中包裹的部分质粒DNA释放到

6、溶液中。7.操作步骤10，加入洗脱液后室温放置1-2min或者更长时间，有助于提高DNA洗脱效率，从而提高产量。8.操作步骤10，如果离心机转子没有盖子或者使用气密型盖子，在将1.5ml离心管盖子扣在DNA吸附柱上后，务必去除DNA吸附柱的盖子(剪掉或者拧断，见Page3-2图示)；因为高速离心时未扣在DNA吸附柱上的盖子容易脱落，造成安全隐患。9.操作步骤6为可选步骤。BufferWA能有效去除可能残留的蛋白，并且能去除大部分内毒素；使用核酸酶含量丰富的菌株(如JM系列和HB101)扩增质粒DNA或者提取的质粒DNA用

7、于转染，需要操作此步骤。四、实验准备1.第一次使用前，将试剂盒携带的RNaseA1全部加入BufferP1中。2.第一次使用前，按试剂瓶所示体积在BufferWA和BufferWB中加入无水乙醇或者95%乙醇，混合均匀。3.每次使用前，检查BufferP2是否析出白色或者晶体状沉淀，如有沉淀在37℃放置数分钟，沉淀溶解后恢复至室温(约20min)后使用。上海莱枫生物科技有限公司质粒DNA小量提取试剂盒使用说明书3-3五、操作步骤（所有离心操作均为室温12,000×g）细菌收集、裂解和中和1.用干净的1.5ml离心管，离心

8、30秒，收集1-4ml细菌培养物中的细菌；弃尽上清。▲收集细菌后，样品数量较少时，建议简短离心，吸除上清；样品数量较多时，建议将离心管倒扣在吸水纸上2min去除残留的菌液。2.加入250μlBufferP1（含RNaseA1），Vortex震荡或者用Tips充分悬浮细菌，直至无可见的菌块。3.加入250μlBuffe