高纯度质粒小提中量试剂盒

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1、◆高纯度质粒小提中量试剂盒◆目录号1218◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外高纯度质粒小提中量试剂盒目录号：1218适用范围：适用于5-15ml中等规模质粒制备（mindpreparations）试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次（121801）RNaseA（10mg/ml）－20℃250µl溶液P14℃25ml溶液P2室温25ml溶液P3室温35ml16ml去蛋白液PE室温第一次使用前按说明加指定量乙醇15ml漂洗液WB室温第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB室温10ml吸附柱AC室温50个收集管（2ml）室温50个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果

2、。-1-储存事项：1.第一次使用时，将试剂盒所带的全部RNaseA加入溶液P1后（终浓度100ug/ml）置于2-8℃保存。如果溶液P1中RNaseA失活，提取的质粒可能会有微量RNA残留，在溶液P1中补加RNaseA即可。2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。4.产品介绍：本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液

3、和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。2.独有的去蛋白液配方，可以高效去除残留的核酸酶，即使是核酸酶含量丰富的菌株如JM系列、HB101也可以轻松去除。有效防止了质粒被核酸酶降解。3.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。获得的质粒产量高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。-2-注意事项：1.所有的离心步骤均在

4、室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf5415C或者类似离心机。2.溶液P3和去蛋白液PE中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。3.提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。一般高拷贝质粒，建议取5-15ml过夜培养14-16个小时的菌液，可提取出多达50µg-60µg的纯净质粒。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应适当加大菌体使用量，使用10-20ml过夜培养物，同时按比例增加P1、P2、P3的用量，其它步骤相同。4.得到的质粒DNA可用

5、琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1相当于大约50μg/mlDNA。电泳可能为单一条带，也可能为2条或者多条DNA条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。5.质粒DNA确切分子大小，必须酶切线性化后，对比DNA分子量Marker才可以知道。处于环状或者超螺旋状态的的质粒，泳动位置不确定，无法通过电泳知道其确切大小。6.洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用

6、水洗脱质粒应该保存在－20℃。质粒DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mMTris-HCl，1mMEDTA，pH8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。-3-操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）提示：第一次使用前请先在漂洗液WB和去蛋白液PE瓶中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!将RNaseA全部加入溶液P1中，混匀，每次使用后置于2-8℃保存。将溶液P3放在冰上预冷。1.取5-15ml过夜培养的菌液，9,000rpm离心1-2分钟，尽可能的倒干上清，收集菌体。2.用500μl溶液P1重悬

7、菌体沉淀，涡旋振荡至彻底悬浮，全部转入一个2ml离心管。如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。3.加500μl的溶液P2，温和地上下翻转4-7次使菌体充分裂解，室温放置4分钟。温和地混合，不要剧烈震荡，以免基因组DNA剪切断裂！所用时间不应超过5分钟！以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠，如果菌体少，很快清亮粘稠后就可以做下一步，不是一定要准确的5分钟。4.加700μl溶液P3，立即温和地上下翻转4-7次，充分混匀时会出现白色絮状沉淀。冰上静置