新景质粒DNA小量试剂盒说明书

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1、产品组成质粒DNA小量试剂盒5次样品50次产品Cat.No.10010051001050核酸纯化柱5个50个2ml离心管5个50个中和指示剂20μl150μlRNaseA*28μlBufferI1.5ml14mlBufferII1.5ml14mlBufferIII2ml20mlBufferW13ml28mlBufferW2（浓缩液）2ml16mlBufferE0.6ml6ml说明书1份1份*样品中的RNaseA已加入到BufferI中。产品储存与有效期1．RNaseA请于-20℃保存。2．加入RNaseA的BufferI请于2~8℃储存。如果储存时间超过6个月，需在BufferI中补加RNas

2、eA至终浓度为100μg/ml。3．其他试剂与物品如果储存于室温（15~25℃），可在两年内保持使用性能无明显变化；如果将产品储存于2~8℃，可延长产品的有效期至两年以上（2~8℃储存的产品使用前应先使产品恢复到室温后再使用）。用户需自备的试剂与物品1.无水乙醇2.1.5ml离心管、移液器及吸头3.一次性乳胶手套等防护用品和纸巾4.台式小量离心机（可配离心1.5ml离心管和2ml离心管的转子）5.水浴锅和旋涡振荡器技术支持杭州新景生物试剂开发有限公司研发部：e-mail:technical@simgen.cn,电话：0571-87983751。质量保证杭州新景生物试剂开发有限公司保证提供的产品

3、是通过质量检验的合格产品。如果用户在使用中发现产品不能满足实验要求，请立即停止使用产品，并联络我公司技术支持获取帮助；或者直接联络我公司当地代理商，提出产品更换要求（注意：如果经过鉴定是因为客户的错误操作所导致的实验失败，我公司只能提供相应的补救措施，保留不予更换的权利）。SimgenPlasmidDNAMiniKit09/20101注意事项BufferII、BufferIII和BufferW1均含刺激性化合物，操作时请戴乳胶手套和防护眼镜，避免沾染皮肤、眼睛，谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时，须立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时请寻求医疗咨询。产品介绍本试剂盒结合了碱裂解法抽提质粒原理及柱

4、纯化核酸技术，可在20－30分钟内从1～5mlLB培养基细菌培养物中快速分离纯化多至20µg高纯度质粒DNA。获得的质粒DNA适用于限制性内切酶消化、测序、文库筛选、连接与转化、体外转录与翻译、强壮细胞转染等分子生物学实验。如果纯化的质粒DNA需要用作较为敏感的细胞转染实验，请选择超纯质粒DNA中量试剂盒（Cat.No.：1006105）。产品适用的样本范围本产品适合从革兰氏阴性细菌（如大肠杆菌）中分离纯化质粒DNA。如果需要从革兰氏阳性细菌中分离纯化质粒DNA，请先用溶菌酶对细菌进行破壁处理，或者电询我公司技术支持获取帮助。操作步骤分析与说明1.起始样本从新鲜培养的平板中挑取一个单克隆菌落，

5、接种到3-5ml含对应抗生素的LB培养基中，37°C，剧烈振荡培养12-16小时。注意事项如下：1.不应吸取储存的甘油菌直接进行培养。长时间储存的甘油菌中的细菌可能已经出现细菌个体间的分化，并混有丢失质粒的细菌。甘油菌必须在含有抗生素的平板上划线，挑选生长良好的单菌落用于接种培养。2.细菌培养时间不应超过16小时。培养时间超过16小时的细菌开始出现溶解现象，可能因此导致质粒DNA的得率降低。3.用于细菌培养的培养基所占容器的体积不应大于1/4。4.将LB培养基中的NaCl含量提高到10g/L，每毫升LB细菌培养物的质粒回收效率能提高2μg左右。2.菌体溶解快速收集的菌体（12000rpm离心3

6、0秒）通常会堆积得比较紧密而不易悬浮，可以改用3000rpm离心5分钟收集菌体，以便于后续悬浮步骤的操作。必须用BufferI充分悬浮细菌，未被悬浮分散的细菌不能被碱性的BufferII溶解。溶解后的细菌中的质粒DNA与基因组DNA均泄漏出来，处于变性状态。3.沉淀菌体碎片和基因组DNABufferIII会中和BufferII中的碱性物质，此时质粒DNA将恢复至超螺旋结构并保留在溶液中，大片段的基因组DNA则在复性的过程中与菌体碎片缠绕在一起而沉淀出来。经过13000rpm离心10分钟后基因组DNA与菌体碎片聚集到1.5ml离心管底部，与质粒DNA分离开来。2SimgenPlasmidDNAM

7、iniKit09/20104.中和指示剂由于细菌的生长条件或者细菌的菌株间的差异，初次使用质粒纯化试剂盒的用户通常难以把握最佳的中和效果。如果事先在BufferI中加入了中和指示剂，加入BufferIII后翻转离心管时，沉淀中的蓝色部分会逐渐消失，直至完全转变成淡黄色沉淀，此时即可判定是充分中和的效果。对于初次使用质粒纯化试剂盒的用户或者是从5mlLB细菌培养物中分离纯化质粒的用户，我们强烈推荐使