人胃癌细胞sgc

《人胃癌细胞sgc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、人胃癌细胞SGC摘要：目的观察γ-生育三烯酚（γ-tocotrienol）对人胃癌细胞SGC-7901生长抑制作用。方法采用离体细胞培养技术，利用细胞生长曲线，单细胞凝胶电泳法、琼脂糖凝胶电泳等方法，观察γ-生育三烯酚对SGC-7901细胞生长抑制及其肿瘤细胞DNA损伤作用。结果γ-生育三烯酚可明显抑制SGC-7901细胞生长；γ-生育三烯酚可引起人胃癌细胞株SGC-7901细胞DNA分子的损伤,且与处理的浓度存在一定的相关性。结论γ-生育三烯酚对SGC-7901细胞生长有明显抑制作用，其抑制机制与参与DN

2、A损伤有关。关键词：γ-生育三烯酚；人胃癌SGC-7901细胞；单细胞凝胶电泳中图分类号：1.引言生育三烯酚是富含于天然谷物、棕榈油中的一种植物化学物，是维生素E的一个亚族，在癌症的化学预防方面起着重要作用。离体实验研究表明，γ-生育三烯酚、富含生育三烯酚的棕榈油可以诱导多种肿瘤系细胞凋亡.freelpus），MCO-17ACO2培养箱（SANYO公司）等。2.1.2试剂γ-生育三烯酚（γ-tocotrienol），纯度97％，购于Davos，新加坡。γ-生育三烯酚溶于无水乙醇，终浓度为0.15％（V/V）

3、，噻唑蓝、溴化乙锭购于Sigma公司等。2.1.3细胞人胃癌细胞（SGC-7901）培养SGC-7901细胞购自北京市肿瘤研究所。该细胞在含1％青链霉素、1％谷氨酰胺和10％胎牛血清RPMI1640（Gibco公司）培养液中，于37℃、5％CO2培养箱中培养，用0.02％EDTA消化、传代。-2-2.2方法2.2.1细胞生长曲线测定将SGC-7901细胞接种于96孔培养板中，每孔10000个细胞，培养24h后，换成含不同浓度γ-生育三烯酚2％胎牛血清培养液，每个剂量设5个重复，继续培养72h和96h。于培养

4、结束前4h，各取培养板一块，加入MTT（1.0mg/L）20μl，培养结束后，小心吸出培养液，每孔加DMSO200μl，混匀后于酶标仪波长570nm处测定吸光度A值，绘制曲线，并计算和绘制细胞增殖曲线。增殖率（IF,%）＝（对照组A值－本底值）－（试验组A值－本底值）／（对照组A值－本底值）×1002.2.2单细胞凝胶电泳收集溶剂对照以及阳性对照(500μmol/LH2O2，作用10min)和浓度15、30、60μmol/L的γ-生育三烯酚作用48h的SGC-7901细胞。将PBS液配制的0.6%正常融点琼

5、脂糖加热溶解，取其100μL滴加在磨砂载玻片上，用盖玻片使胶均匀展开，置4℃下固化5min，然后去除盖玻片，即第一层胶。取新制备的细胞悬液样品10μL与0.6%低融点琼脂糖90μL在37℃下充分混匀（细胞密度，镜下每视野20～30个细胞）叠加在第一层胶上，立即放上盖玻片使胶均匀展开，4℃固化10min，即第二层凝胶。根据需要可以加铺第三层低融点凝胶。取下盖玻片，将凝胶载玻片浸于新配制的裂解液（2.5mol/LNaCl、100mmol/LNa2EDTA、10mmol/LTris、1%肌氨酸钠，pH10；用前加

6、入1%TritonX-100和10%DMSO）中，置4℃冰箱，裂解持续时间1h。从裂解液中取出载玻片，用去离子水洗去过多的盐，小心用滤纸吸干多余水分，按一定方向水平移入电泳槽中，将新配制的电泳缓冲液（1mmol/LNa2EDTA和300mmol/LNaOH，pH13）倒入电泳槽，液面高于载玻片2mm，避光静置30min。在低温避光条件下根据不同样品的实际情况摸索出最佳电压和电流设置，电泳时间30～45min。从电泳槽中取出玻片，用去离子水清洗，滴加50μL溴化乙锭（ethidiumbromide，EB），染

7、色5min后，荧光显微镜下观察结果，24h内阅完。在荧光显微镜下，每玻片观察10个视野，计算出拖尾细胞比率，用目镜测微尺测量拖尾细胞尾长。然后选择其中部分有代表性的拖尾细胞，拍照。2.2.3琼脂糖凝胶电泳收集60μmol/Lγ-生育三烯酚作用48h的SGC-7901细胞，PBS缓冲液洗2次，弃上清。加入DNA抽提液0.5mL重悬细胞，37℃水浴60min。加入20mg/mL的蛋白酶K至终浓度100μg/mL，边加边搅拌，至溶液呈粘稠状，50℃水浴180min。冷却至室温，加入等体积饱和Tris-HCl酚溶液

8、，上下轻轻转动离心管混匀，直至水相与酚相混匀并呈乳状液。室温5000rpm离心15min，使两相分开（水相在上层，酚相在下层），DNA在水相。氯仿：异丙醇（24：1）抽提一次，室温5000rpm离心15min。将上层水相移出，加入0.1倍体积的乙酸钠，再加入2～3倍体积的无水乙醇，缓慢摇匀，可以见到乳白色DNA絮状沉淀。小心用玻璃棒挑出絮状沉淀，用75％乙醇洗涤2次，再加入1mL75％乙醇，室温5000rpm离心