人胃癌sgc7901细胞膜钾离子通道的特性

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1、人胃癌SGC7901细胞膜钾离子通道的特性摘要:目的研究人胃癌细胞系SGC7901细胞膜钾离子通道特性.方法以人胃癌细胞系SGC7901为研究对象，采用穿孔膜片钳全细胞记录法.结果人的胃癌SGC7901细胞系的静息膜电位为（-32.2±2.2）mV，在钳制电压-40mV，阶跃电压在-80～+80mV，记录到一种跨膜电流，该跨膜电流具有电压依赖、外向整流特性，该电流在延迟25ms后最大激活，800ms内不失活，翻转电位在-60～-40mV，能被已知的钾通道的阻断剂4-AP或TEA阻断.结论在人胃癌SGC7901

2、细胞系细胞膜上存在延迟整流钾离子通道.　　Keyachneoplasm;potassiumchannels;patch-clamptechniques　　Abstract:AIMTostudythepropertiesofpotassiumchan-nelofhumangastriccancercelllineSGC7901.METHODSThemembranecurrentp.RESULTSThe　restpotentialofSGC7901cellsV.SimilarmembranecurrentVand

3、testpotentialsrangedfrom-80to+80mV.Thecurrentexhibitedpropertiesofvoltage-dependent，outsandnoorlittleinactivationoverthe800msvoltagepulse.Ithadareversepotentialof-60～+40mVandcouldbeblockedbyK+channelblockers4-APandTEA.CONCLUSIONDelayedrectifierK+channelexis

4、tsinhu-mangastriccancercelllineSGC7901.　　0引言　　肿瘤是危害人类健康的重大疾病［1-4］，我国胃癌发病率位于世界榜首［5-8］.近年研究表明，在某些肿瘤细胞上也发现了类似于神经、肌肉等可兴奋细胞上的电压门控钾通道［9］，且与肿瘤的恶性增殖有关［10］.目前对于胃癌细胞细胞膜离子通道特性的研究国内外还未见报道.我们利用穿孔膜片钳技术研究胃癌细胞细胞膜钾离子通道特性，为进一步研究胃癌的发生及发展与钾离子通道的关系奠定基础.　　1材料和方法　　1.1材料河豚毒素（tetro

5、dotoxin，TTX）、nys-tatin、4-氨基吡啶（4-AP）、盐酸四乙胺（TEA-Cl）、葡萄糖、HEPES、三羟甲基氨基甲烷（Tris）购自Sigma公司，RPMI1640培养基购自Gibco公司，氯化铯（CsCl）购自华美生物制品公司，玻璃电极毛胚购自上海脑研究所.测细胞膜静息电位的电极内液成分（mmolL-1）:KCl135;EGTA0.1;MgCl22;ATP3;HEPES12;pH用CsOH调整到7.2.记录用电极内液成分（mmolL-1）:KCl140;HEPES10，再加入400mgL

6、-1穿孔剂nystatin，用KOH调整pH到7.2.细胞外液成分（mmolL-1）:NaCl130;KCl5;CaCl21;MgCl21;Glucose10;HEPES10，用Tris调整pH到7.4.根据实验中的需要，将用细胞外液配制的各种药物储存液（CdCl2TTX）稀释至所需终浓度（CdCl21mmolL-1;TTX1μmolL-1）.　　1.2方法取对数生长期的胃癌细胞SGC7901，用2.5gL-1胰酶消化传代于3.5cm的培养皿中，继续培养48～72h用于实验，选择直径在25～30μm的细胞.细

7、胞静息膜电位的测定及穿孔膜片钳记录采用paq计算机运行Pclamp6.0.4程序控制各种参数，通过A/D和D/A转换器与Axon-200B型膜片钳放大器相连，电压电流信号经滤波后及模数转换后存于硬盘.保持室内温度在18℃～22℃，在倒置显微镜下，利用微操纵仪操纵，电极内液用测量细胞静息电位的电极内液，形成高阻抗封接（giga-seal），其阻值>109Ω，稳定5min，给予负压或ZIP电击破膜，在电流钳下测得的电压为细胞的静息电位.电极内液用测量钾离子电流的电极内液，形成高阻抗封接（giga-seal）

8、，其阻值>109Ω，约10min后出现典型的膜电容电流，表明已形成全细胞膜片状态，给予膜电容补偿后进行穿孔膜片钳记录.加入药物通过“Y”管给药系统.　　统计学处理:全细胞膜片钳记录的数据采用Pclamp6.0.4程序进行分析，计量资料以x±s表示，并用t检验进行显著性检验.　　2结果　　由Axon-200B膜片钳放大器的电流钳制（cur-rentclamp）方式，测得细胞的静息电位为（-32.