人肺腺癌a-549细胞膜钾离子通道特性与细胞增殖关系的研究

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1、泸州医学院硕#学位论文人肺腺癌A-549细胞膜钾离子通道特性与细胞增殖关系的研究姓名：李向楠申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：戴天阳20040501英文缩写及中英文对照WCRwhole-Cellpatch-Clamprecording全细胞膜片钳记录NSCLCnon-small-eelllungcancer肺小细胞肺癌SCLCsmall-celllungcancer小细胞肺癌Aabsorbency吸光度MTTcolorimetric3-(4.5-dimethylthiazd-z-yl)-z,四甲基偶氮唑盐比色法5-dipheny

2、ltetrazoliumbromidecolorimetryTPtestpotential测试电压HPholdingpotential钳制电压Cmmembranecapacitance膜电容I-Vcurrent-voltagerelationship电流-电压曲线TEAtetraethylamine四乙胺人肺腺癌A-549细胞膜钟离子通道特性与细胞增殖关系的研究摘要H的：探讨肿瘤细胞离子通道表达异常与肿瘤发生、发展和增殖的关系是当前肿瘤基础研究的新热点。本研究通过观察人肺腺癌A-549细胞膜电压门控性K+电流的特性及钾通道阻断剂四乙胺

3、（TEA）对A-549细胞K+电流和细胞增殖的影响，探讨应用钾通道阻断剂抑制肺腺癌细胞增殖的可行性，为该领域的进一步研究奠定基础。方法：以人肺腺癌细胞系A-549细胞为研宂对象，培养24-72小时后，选择单个贴壁良好、立体感强的细胞备用。①细胞电生理实验：用全细胞膜片钳技术记录细胞膜离子通道特性。将微推进器推进微管电极尖端贴至细胞膜，负压抽吸形成高阻封接，并吸破细胞膜形成全细胞膜片；采用去极化阶跃方案引出A-549细胞的电压依赖性外向K+电流，然后将10mmol/L的TEA加至细胞浴液屮，记录TEA对K+电流的影响。②细胞体外增殖实验

4、：用四甲基偶氮唑盐比色试验（MTT法）检测0.2、2、20、40和60mmol/L的TEA分别作用细胞24、48和72小时的酶联检测吸光度值（A）,比较不同TEA组对细胞增殖的影响。结果：①全细胞膜片钳记录模式下，A-549细胞在测试电压范围-30至+110mV，保持电压为-70mV时,记录到一种跨膜外向性电流，该跨膜电流具有电压依赖性，并且500ms内不失活；将10mmol/L的TEA加入细胞浴液，可明显抑制该跨膜离子电流，在测试电压为+110mV吋，抑制程度为电流从1057.52土59.17pA降低至212.26土11.96pA，

5、电流抑制率为79.92%（p<0.01）。②MTT法细胞增殖实验，各TEA剂量组作用细胞24小吋后A值比较显示：A值随着TEA浓度的增加而降低，实验组20、40和60mmol/L的TEA与空白对照组以及组间两两比较，差异具有统计学意义（p<0.05），而0.2和2mmol/L的TEA与空白对照组相比差异无统计学意义，表明20、40和60mmol/L的TEA能明显抑制肺腺癌A-549细胞的体外增殖，抑制率分別为43%、61%和78%。结论：人肺腺癌细胞系A-549细胞中存在外向性电压门控性钾通道，该钾通道可被TEA阻断；外向性电压门控性

6、钾通道在肺腺癌A-549细胞增殖过程屮起重要作用，钾通道阻断剂TEA能抑制A-549细胞的增殖，对细胞增殖的抑制与TEA存在剂量依赖关系。关键词：肺腺癌；钾离子通道；全细胞膜片钳记泶；四乙胺；细胞增殖ChannelsandTheAssociationofVoltage-gatedK+ProliferationofHumanLungAdenocarcinomaCellsAbstractObjective:Potassiumchannelsarethemostubiquitousanddiversefamilyofplasmamembra

7、neionchannels.ThereisnowevidencethatdrugswhichblockK+channelactivityalsoinhibitedtheproliferationofsometypesofcells.SotostudytheassociationbetweenactivationofKjchannelswithgenerationandproliferationoftumorcellsisveryimportant.Weinvestigatedtheelectrophysiologicalpropert

8、iesofhumanlungadenocarcinomacelllineA-549andcellproliferationbysuppressionofK+channelactivity.Tostudywhetherth