cpg-odn对肺腺癌细胞增殖的抑制作用及其与runx3关系的初步研究

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1、江苏大学硕士学位论文CpG--ODN对肺腺癌细胞增殖的抑制作用及其与Runx3关系的初步研究姓名：赵阳申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：许化溪；王胜军20120620江苏大学硕士学位论文摘要研究目的：探讨CpG-ODN对人肺腺癌A549细胞的增殖及其抑癌基因Runx相关转录因子3(Runx3)表达的影响，探讨TLR9与肺腺癌发生发展的关系，为基于TLR9的肿瘤治疗寻找理论依据。研究方法：(1)不同浓度CpG-ODN作用于人肺腺癌A549细胞系，用MTT法检测细胞的增殖能力。．(2)CpG—ODN诱导A549细胞后，用实时荧光定量PCR(QRT-PC

2、R)和Westernblot方法，分别从mRNA和蛋白水平检测Runx3的表达情况。(3)针对Runx3基因的特定靶位，采用化学合成法合成Runx3siRNA，并瞬时转染A549细胞，用荧光显微镜对Runx3siRNA转染的A549细胞进行转染效率测定；用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)和Westernblot方法，分别检测Runx3siRNA瞬时转染入A549细胞后，Runx3在mRNA和蛋白水平的表达情况。(4)Runx3siRNA瞬时转染A549细胞后，用MTT法观察CpG．ODN对转染前后的细胞生长作用的影响。研究结果：(1)CpG—ODN能明显抑制

3、人肺腺癌A549细胞的增殖。(2)不同浓度CpG．ODN刺激A549细胞后，细胞中Runx3基因在ICp0-oDN对肺腺癌细胞增殖的抑制作用及其与Runx3关系的初步研究mRNA和蛋白表达水平均增加。(3)Runx3siRNA瞬时转染A549细胞后，根据荧光显微镜下观察到的荧光细胞比例，判断siRNA转染效率，约为40％；Real-timePCR结果显示，与未转染组相比，Runx3siRNA转染A549细胞24h后，Runx3基因表达受到明显抑制；westernblot检测显示，与未转染组相比，Runx3siRNA转染A549细胞24h后，Runx3蛋白含量明显

4、下降。(4)Rtmx3siRNA的瞬时转入对CpG．ODN刺激的A549细胞增殖抑制作用明显减弱。结论：人肺腺癌A549细胞表达TLR9基因，TLR9激动剂CpG．ODN作用于人肺腺癌A549细胞后，能明显抑制A549细胞的增殖。不同浓度CpG．ODN刺激A549细胞后，细胞中抑癌基因Runx3在mRNA和蛋白表达水平均增加。本试验针对Runx3基因的特定靶位，用化学合成法合成Runx3siRNA，Runx3siRNA的瞬时转入对CpG．ODN刺激的A549细胞增殖抑制作用明显减弱，TLR9的配体CpG．ODN可抑制A549细胞的增殖，同时正向调控Runx3的表

5、达。由此推测，CpG．ODN可能通过上调Runx3抑制A549细胞的增殖。关键词：CpG-ODN；Runx3；A549细胞；细胞增殖Il江苏大学硕士学位论文Objective：ABSTRACTThepurposeofthisstudyistoestablishthetheoreticalbasisofTLR9-basedapproachforcancertreatmentbystudingtheinfluenceofCpG—ODNonproliferationoflungadenocarcinomacell(A549)andexpressionoftumor-s

6、uppressorgenesrunt-relatedtranscriptionfactor3(Runx3)，analyzingtherelationshipebetweentheTLR9expressionandlungadenocarcinomaoccurrenceanddevelopment。Methods：(1)DifferentconcentrationofCpG—ODNwasusedtotreatthelungadenocarcinomaA549celllines，anddetectethecellproliferationbyMTTmethod。(2

7、)Real—timequantitativefluorescencePCR(QRT-PCR)andWesternblotwereusedtoanalyzetheexpressionoftumor-suppressorgenesRunx3inmRNAandproteinlevels。(3)BasedonthespecifictargetsoftheRunx3gene，Runx3siRNAwassynthesizedbychemicalsynthesis，andthentransfectedintoA549cellstransiently,fluorescentmi

8、croscopewasu