廿烷五稀酸对肺腺癌细胞的抑制作用实验研究

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1、廿烷五稀酸对肺腺癌细胞的抑制作用实验研究作者：尹曾，姚侠，石俊，韩光海，李明哲　［摘要］［目的］研究廿烷碳五烯酸（EPA）对肺腺癌细胞的抑制增殖作用.［方法］在细胞培养、动物实验及临床应用实验基础上，进行细胞凋亡、肿瘤细胞活力及急性毒性实验.［结果］EPA对肺腺癌细胞具有明显地抑制增殖作用，EPA作用后肺腺癌细胞周期的G1，S期细胞百分率明显降低，随时间的延长及剂量增大而效能增强;EPA可引起细胞凋亡;EPA作用后血清TNF-α，IL-6，IL-1水平显著降低.［结论］长期接受EPA治疗可调节机体炎症反应，提高机体免疫力，而且单剂量应用即具有抑制肿瘤细胞生长的作用，呈时间-剂量依赖性.［关

2、键词］廿烷五稀酸;细胞凋亡;细胞因子;肺腺癌ABSTRACT:OBJECTIVETostudyofinhibitoryeffectsofofEPAtotheadenocarcinomaoflungcell.METHODSBasedoncelldeveloping，animaltestandclinictest，thecellapoptosisandcancercellvitalityandacutepoisontestsaoflungcellEPAaoflungcelllifecircle，andEPAaandthemoredoseEPAerecEivedEPAtreatmentcanac

3、modatebodyinflammatoryreaction，notonlyenhancebodyimmunity.Singledoseapplicationcansuppresstumorcellgroeanddosedependent.Keyaoflung肺癌是世界上发病率和死亡率均较高的疾病之一，近年来分子生物学技术的应用使肺癌相关研究有了较大的进展.自20世纪80年代始，大量的实验研究结果表明EPA与机体免疫及抗肿瘤密切相关.本实验通过将EPA作用于人肺腺癌细胞株LA795，探讨了EPA对肺腺癌细胞的抑制增殖作用.1材料与方法1.1材料实验所用EPA为cis-5，8，11，14，1

4、7-EPA，为美国Sigma公司产品，分子式为C20H30O2.将EPA用无水乙醇溶解为10mmol/L，封存于真空瓶中，置-70℃冰柜中备用.人肺腺癌细胞株LA795由中国医学科学院肿瘤研究所提供.实验动物取Balb/c纯系小鼠，鼠龄为5～6周，体重为18～22g，雌雄兼用.培养基为含100mL/L小牛血清的RPMI1640;胰蛋白酶和端粒酶活性检测试剂盒为华美生物工程公司产品;三磷酸腺苷为齐齐哈尔市第二制药厂产品.TNF-α用RIA试剂盒（北京邦定生物医学公司）测定，IL-6，IL-1用ELISA试剂盒（美国Genzyme公司）测定.1.2方法1.2.1细胞培养将肺腺癌细胞株LA795

5、用含小牛血清的RPMI1640培养液培养，置于50mL/L二氧化碳、37℃的培养箱中进行传代培养.1.2.2裸鼠人肺癌模型的建立将已制备成细胞悬液的LA795（5×1010个/L），取0.2mL注射于裸鼠背部皮下，取肿块平均直径达1.0cm，肿瘤无自发性出血、坏死及感染病灶的裸鼠作为实验对象.1.2.3三磷酸腺苷氯化镁的配制计算出每支三磷酸腺苷及氯化镁的摩尔浓度［1］，使用前按4.76∶1.00（V/V）混合，使之成为等摩尔浓度的混合液（13.6mmol/L），备用.1.2.4细胞的处理及实验分组将肺腺癌细胞LA795用含小牛血清（100mL/L）和抗生素（10万U/L青霉素和100mg/

6、L链霉素）的RPMI1640培养基分别种植在25mL细胞培养瓶盒6孔板中，在37℃含50mL/L二氧化碳的培养箱中培养，反复传10代，待细胞性能稳定后加药进行实验.实验取64只小鼠，雌雄兼用，分为4个组，即EPA组、三磷酸腺苷氯化镁（ATP-MgCl2）组、氯化镁组及空白对照组，每组各为16只.1.2.5细胞增殖抑制率的测定将实验用6孔板作为培养皿，每孔加入等量肺腺癌细胞培养24h，大部分细胞贴壁后加入试剂，加药前后每日均用2.5g/L胰蛋白酶消化，充分吹打，使细胞均匀漂浮在培养液中，经台盼蓝染色后记数活细胞，每组测3孔，每孔计数4次，连续4d，绘制生长曲线，计算出细胞增殖抑制率，其公式如

7、下:细胞增殖抑制率=（1-实验组细胞数对照组细胞数）×100%1.2.6细胞周期时相中DNA含量测定将人肺腺癌细胞株LA795置入50mL细胞培养瓶中，置于37℃二氧化碳孵箱内培养.当细胞处于对数生长期时，调节细胞数为1×109个/L，分别加入终浓度为0.25，0.50，1.00g/L的EPA，同时设空白对照组，继续培养24，48h后分别收集细胞，用流式细胞仪检测，记录细胞周期的时相比例，并根据DNA含量组方图中的AP亚