5氟尿嘧啶对肺腺癌a549细胞生长抑制作用机制的研究论文

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1、5氟尿嘧啶对肺腺癌A549细胞生长抑制作用机制的研究论文张德海张晴张翠云高振月【摘要】目的研究5氟尿嘧啶抑制人肺腺癌细胞生长的作用方式。方法用不同浓度的5氟尿嘧啶处理体外培养的人肺癌A549细胞，应用MTT法、倒置相差显微镜和吖啶橙染色法分析检测A549细胞存活率的变化及细胞形态结构的变化。结果不同浓度的5氟尿嘧啶处理A549细胞，随着药物浓度的增加和处理时间的延长，细胞存活率明显下降;且低浓度使细胞呈铺展状态，细胞质内空泡增多，吖啶橙染色显示酸性膜泡增多，高浓度使细胞变圆，出现凋亡状态。结论5氟尿嘧啶能明显抑制A

2、549细胞的生长.freelanlungcarcinomacellsA549.MethodsTTassay,invertedmicroscopeandacridineorangestaininginecellviabilityandmorphologicalchanges.ResultsUsingdifferentconcentrationsof5fluorouraciltodealenttime,cellsurvivalratedecreasedsignificantly;andlo,acridineorangesta

3、iningshoadethecellroundandcellapoptosis.Conclusion5fluorouracilinhibitedthegroa公司)。5氟尿嘧啶(深圳万乐药业有限公司)用二甲基亚砜(DMSO)溶解。1.2细胞培养A549肺癌细胞系在含10%胎牛血清的HAM′S/F12培养基中，置于37℃，5%CO2饱和湿度的培养箱中培养。每3d半量换液传代，实验中选用对数生长期细胞。5Fu用DMSO溶解成1mol/L储存液-20℃保存，使用前用细胞培养液稀释成所需浓度。1.3实验分组根据加入的5氟

4、尿嘧啶浓度不同将细胞分组：①对照组;②加药组(分别为5、10、20、40、80、100、200、300、400μM)。将各组细胞接种到24孔和96孔板中，每孔细胞浓度为2×104/ml，置于37℃、5%CO2饱和湿度的培养箱中培养24h后加药，分别于加药后24、48h进行观察和分析。1.4细胞形态学观察各组细胞加药24、48h后，倒置相差显微镜下观察24、48h细胞形态变化。1.5MTT法检测细胞琥珀酸脱氢酶的活性将上述培养于96孔板中的细胞根据实验分组加入不同浓度的5氟尿嘧啶，于各组药物处理终止前4h每孔加入5mg/m

5、lMTT液20μl，继续培养4h，然后小心吸出各孔内培养液，加入100μlDMSO，振荡至结晶全部溶解，酶标仪上570nm测定光密度(OD值)。取各平行孔OD值的平均值,根据下式计算细胞相对存活率:存活细胞%=(实验组OD值/对照组OD值)×100%(以不含细胞的培养液为空白组调零)。1.6吖啶橙染色观察细胞质内酸性膜泡变化上述培养于24孔板中的细胞用不同浓度的5氟尿嘧啶处理48h后，将旧培养液吸出，PBS洗两遍，加入两滴0.1mg/ml吖啶橙染液染色1min，PBS洗两遍，于倒置荧光显微镜下观察结果。1.7统计学处理实

6、验数据以x±s表示,经重复测量资料的方差分析,.freelmedcelldeath)，分别被称为Ⅰ型程序性细胞死亡和Ⅱ型程序性细胞死亡。多年来，人们对Ⅰ型程序性细胞死亡——细胞凋亡的形态学、参与分子及其调控机制的研究颇多，对其在抑制肿瘤细胞生长中的作用较为了解，而对Ⅱ型程序性细胞死亡——细胞自噬，了解较少。自噬是细胞内的物质成分被溶酶体降解的统称，它是真核细胞所特有的，负责长寿命蛋白和一些细胞器的降解再利用7，在生物体的发育、正常生理活动和许多疾病中发挥重要作用。近年来许多研究表明，自噬与肿瘤的关系非常密切，像凋亡一样，

7、自噬在调节癌症的发生，发展和决定肿瘤细胞对抗癌治疗的反应等方面起着很重要的作用，然而，对这一作用，研究者们颇有争议，至今尚无定论。本实验细胞存活率检测结果表明(表1)，用不同浓度的5氟尿嘧啶处理A549细胞24、48h，细胞存活率均呈现浓度和时间的依赖性关系，说明5氟尿嘧啶具有抑制肺腺癌细胞生长的作用。形态学观察结果显示(图1)，随5氟尿嘧啶浓度的增高，细胞表现出不同的反应：低浓度(200μM)时，细胞呈铺展状态，细胞质内空泡增多;高浓度(≥300μM)时，细胞变圆，出现凋亡现象。这一结果提示，5氟尿嘧啶抑制肺腺癌

8、A549细胞生长的作用方式可能是低浓度时诱导细胞发生自噬、高浓度时引起细胞凋亡。细胞自噬可能是在应激条件下被激活，起到延缓细胞凋亡的作用。为了进一步证实5氟尿嘧啶低浓度时是否诱导了细胞自噬的发生，我们采用吖啶橙染色方法来观察自噬泡(autophagicvacuoles)是否存在。吖啶橙染色结果显示(图